면역세포의 핵-세포질 염색

소개글

면역세포의 핵과 세포질을 염색하여
형광 현미경으로 관찰한 실험에 대한 레포트입니다.

목차

목적
실험기구 및 재료
실험방법
결과
고찰
참고

본문내용

목적 THP-1(monocytic cell line) 세포를 Hoechst와 CFSE(Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester)를 이용하여 세포핵과 세포질을 염색한 후 형광현미경으로 관찰하고 분석한다.
실험 기구 및 재료
ell, 1xPBS, CFSE(CFDA-SE), Hoechst, FBS(fetal bovine serum, 우혈청), 1.5ml tube, 15ml conical tube, pipette, tip, timer, Hemocytometer, Slide glass, cover glass, Mounting solution, 형광현미경, 호일
실험방법
5min)
상층액을 제거하고, 1xPBS 10ml로 부유시킨 후 Hemocytometer를 이용하여 cell counting하고 원심분리한다.(조건 동일)
2x10^6 cells/ml이 되도록 1xPBS로 부유시킨 후 1ml을 덜어 15ml tube에 넣고 원심분리 한다(조건동일)
상층액을 제거한 후 1xPBS 1ml로 cell을 부유시킨 후 호일로 빛을 차단하고 CFSE(stock: 20mM) 1ul를 넣어 8분 동안 gentle vortexing 한다.
동량의 FBS(1ml) 를 넣고 1분 동안 gentle vortexing 한다.
1xPBS 3ml 추가한 후 원심분리한다. (조건동일)
상층액을 제거하고, 1xPBS 1ml을 이용하여 1.5ml tube에 옮긴 후 원심분리한다. (Tube를 호일로 싸서 빛을 차단한다.)
으로 희석된 Hoechst 500ul를 넣고, 상온, 암상태로 5분간 배양한다. (2.5분 경과 후 tapping)
1xPBS 500ul 추가한 후 원심분리한다.
상층액 제거 후 1xPBS 1ml 로 부유시킨 후 원심분리한다




면역형광표지법.
면역반응에서 항원-항체반응의 특성을 이용하여 세포의 화학조성을 연구하는 것.
해부학적으로 특정세포에 특정분자의 위치를 확인하는데 사용되는 방법이다. 원리는 일단 신경전달물질 후보 분자는 화학적으로 순수하게 분리되어 동물의 혈류 내 주입되어 면역반응을 자극한다. (가끔 면역반응을 일으키기 위해 후보 분자와 더 큰 분자를 화학적으로 결합시켜 주입되기도 한다.) 면역반응 중 하나는 이물질 분자의 특이적 위치에 단단하게 결합하는 항체의 생성이다. 이들 특이적 항체 분자는 접종된(immunized) 동물의 혈액 표본으로부터 회수되어 현미경상에서 보여질 수 있는 색을 마커로 표지된다. 이 표지된 항체가 뇌조직 절편에 적용되어 후보 분자와 결합되어 후보 분자를 포함하는 세포들만 특정 색깔로 보여질 것이다.
면역세포화학법은 특이적 항체가 생성되게 한 분자(신경전달물질 및 합성효소)를 가진 세포의 위치확인에 사용될 수 있다. 신경전달물질

참고 자료

없음