[유전] DNA sequencing

소개글

ppt와 doc문서 압축한것입니다...

목차

-Dideoxy chain termination method
(Sanger method)

-Chemical degradation method
(Maxam & Gilbert method)

본문내용

* DNA 염기서열 분석
초기의 염기서열 결정방법은 A. Maxam과 W. Gilbert의 chemical degradation 방법과 F. Sanger와 A.R. Coulson이 개발한 chain determination 방법이다. 초기에는 degradation 방법이 많이 사용되어졌으나 DNA가 많은 농도로 필요하다는 단점이 있고 단시간 내에 훨씬 긴 염기서열을 읽어낼 수 있는 termination 기법의 새로운 개발로 인하여 Sanger method가 많이 이용되게 되었다. Enzymatic method는 chemical method와 달리 동일한 band가 안 나오므로 더욱 정밀하며 따라서 많이 사용되고 있다. 이러한 눈부신 약진은 분자생물학에 대변혁을 일으켰다. 이들 DNA염기서열결정방법( DNA sequencing)은 유전자의 일차구조를 결정할 수 있게 하였으며, 궁극적으로, 인간게놈의 30억 염기쌍의 서열을 알 수 있게 되었다. 유전정보를 가지는 DNA의 염기서열을 알아내는 것은 분자생물학 연구에 있어서 가장 기본적인 정보를 제공하여 주는 중요한 실험이다.

(1) Sanger 사슬종결 서열분석 방법
Sanger 방법의 첫 단계는 단사 형태로 클론 된 DNA를 제공하는 M13 파아지 또는 파아지미드와 같은 벡터에 DNA를 클론하는 것이다. 지금은 이중사 DNA를 가지고도 간단히 열처리로 염기서열 판독을 위한 단사 DNA를 만들 수 있다. 단다 DNA에 약 20개 염기 길이의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 잡종화 시킨다. 이 프라이머는 벡터의 다수클로닝 부위 오른쪽 옆에 잡종화할 수 있도록 고안되어 그 3’말단은 다수클로닝 부위내에 있는 삽입체를 향하게 된다.
만약 DNA중합효소의 Klenow 절편을 이용하여 프라이머를 연장한다면 삽입체에 대해 상보적인 DNA를 만들 수 있을 것이다.

참고 자료

없음

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