DNA 염기 서열 분석법 (DNA sequencing method)

소개글

DNA 염기 서열 분석법인 Maxam-Gilbert Method와 Sanger Method 두 가지에 관한 실험 과정을 이해하기 쉽도록 그림과 함께 정리한 리포트 입니다.

목차

1. Maxam-Gilbert Method
2. Sanger-Coulson Method

본문내용

DNA sequencing

1. Maxam-Gilbert method (chemical cleavage method)

dsDNA 사슬을 끊는다. 각각의 염기에 특이적으로 작용하는 chemical agents를 이용한다. 이때 방사선 동위 원소 또는 형광 물질로 5‘ 앞쪽에 표지를 하게 된다. 이때 chemical agent는 굉장히 적은 양을 사용한다. 많은 양을 사용하면 긴 band가 생길 확률이 적어진다. 이 실험에 사용되는 chemical은 매우 toxic하므로 현재는 사용하지 않는다.

과정
1. 5‘ labelling of dsDNA (polynucleotide kinase 이용)
2. DMSO (dimethyl sulphoxide) 첨가, 90℃
3. Denaturation (ssDNA가 된다)
4. 전기영동
5. Light chain과 heavy chain의 분리, purine이 많은 strand가 heavy chain, pyrimidine이 많은 chain은 light chain
6. DNA 사슬 두 가닥 중 한 가닥을 분리
7. DNA 한 가닥을 chemical agents를 이용 각각의 agents에 대한 cleavage reaction 실시.
8. 전기 영동으로 서열 결정
2. Sanger-Coulson method (chain termination method)

Chain termination method는 ssDNA가 필요하기 때문에 sequencing하려는 분자는 M13 vector를 이용하여 클로닝한다. Sequencing을 위해 다른 상보적 사슬을 중합해야 하므로 ssDNA를 사용한다. DNA 중합시 ddNTP (dideoxy NTP)를 이용하여 반응이 종료되게 한 후 전기영동으로 확인한다.

참고 자료

없음