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[면역학실습] NO assay와 ELISA를 이용한 resveratrol의 항염증 효과 확인 (하)

화루륵
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최초 등록일
2023.01.21
최종 저작일
2022.04
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소개글

하나의 실험이 2주차에 걸쳐 진행되어 리포트가 (상)편과 (하)편으로 구성되어 있습니다.
(상)편은 cell treatment까지 다룹니다.
(하)편은 NO assay와 ELISA를 진행합니다.

목차

1. Introduction
1) Macrophage
2) LPS (Lipopolysaccharide)
3) NO (Nitric Oxide)
4) NO assay
5) ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)

2 Protocol
1) NO assay
2) ELISA

3. Results
1) NO assay
2) ELISA for TNF-α
3) ELISA for IL-6

4. Discussion
1) NO assay
2) ELISA

5. References

본문내용

Ⅰ Introduction

1. Macrophage
면역계 세포들은 세포내 기생체에 대해 방어하는 역할을 수행한다. 대식세포의 항미생물 작용은 세포내 lysosome에 들어 있는 여러 가지 가수 분해 효소의 증가와 NADH oxidase의 활성에 의한 활성산소종의 생성, NO의 생성에 의해 이루어진다. 그러나 과량의 활성산소종 및 NO는 조직을 손상시키고 염증을 유발할 수 있다. 따라서 이 두 가지 활성 물질의 생성은 조절될 필요가 있다.

2. LPS (Lipopolysaccharide)
LPS는 Gram staining (-) bacteria의 세포벽을 구성하는 성분으로 염증반응에 관련된 pathogen이다. LPS가 체내 노출 시 Toll-like receptor 4 (TLR4)를 경유하여 식세포에 activating signal을 주고 inducible NO synthase (iNOS)의 발현에 영향을 주어 NO를 많이 합성할 수 있게 한다.

3. NO (Nitric Oxide)
NO는 면역반응을 활성화시키는 핵심물질 중의 하나로서, 심혈관계에서 혈압을 유지하고 뇌에서 신경 전달을 조절하는 등의 역할을 한다. 생리학적으로 중요한 messenger, effector molecule이므로 생체 조직이나 유액에 존재하는 NO를 측정하는 것이 중요하다. Nitric oxide synthase (NOS)는 L-arginine을 산화시켜 NO와 L-citrulline를 생성하는 효소이다. 세 가지 형태의 NOS가 존재하는데 neuronal NOS(nNOS), endothelial NOS(eNOS), inducible NOS(iNOS)가 이에 해당된다.

4. NO assay
Griess reagent는 Griess에 의해 고안된 아질산 및 아질산 이온의 검출 정량에 사용되는 시약이다. Griess reagent의 성분인 NEDHC, Sulfanilamide가 NO₂⁻와 반응하여 Azo coupling을 이루는데 NO 함량이 높을수록 선홍색을 띤다.

참고 자료

박경일, 일산화질소 (nitric oxide) 정량을 통한 바지락 (Ruditapes philippinarum) 의 흔들림 스트레스 측정.
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