[면역학실습] Hybridoma cell and antibody purification

소개글

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목차

1. Introduction
1) 단일클론항체
2) HAT 배지
3) PC61
4) Resin

2. Protocol
1) 마우스 면역 획득
2) 세포 융합
3) 항체 수집
4) 항체 분리 및 정제

3. Results

4. Discussion

5. Assignments
Monoclonal antibody, polyclonal antibody가 활용되는 분야
1) Immunoassay
2) Treatment

6. References

본문내용

Ⅰ Introduction

1. 단일클론항체
항원은 다양한 에피톱을 가지고 있고 각각에 대한 항체를 분비하는 여러 B세포의 클론 분화와 증식을 유도한다. 각각 하나의 에피톱을 인지하는 여러 항체가 섞인 혈청항체를 다클론항체라고 한다. 하나의 에피톱에 특이성을 갖는 단일클론에서 유래한 항체를 단일클론항체라고 한다. 항원을 동물에 주입하고 B세포를 추출하면 다클론항체를 얻을 수 있고, 그 중에서 단일클론항체를 얻기 위해서는 면역을 획득한 동물에서 추출한 B세포를 골수종 세포와 융합하여 hybridoma cell을 제조하여야 한다.

2. HAT 배지 (Hypoxanthine-Aminopterin-Thymidine medium)
핵산를 합성하기 위해서는 당이나 아미노산으로부터 생합성하는 de novo pathway, 또는 퓨린, 피리미딘과 같은 전구체를 재사용하는 salvage pathway를 거친다. HAT 배지는 salvage pathway의 전구체인 hypoxanthine과 thymidine을 포함하며, aminopterin 성분은 de novo pathway를 억제한다. 따라서 HAT배지에서 세포를 배양하면 salvage pathway을 통해서만 핵산을 합성해야 한다. Salvage pathway의 경우 효소 HGPRT와 TK가 필요하다. 따라서 효소가 1개라도 결손된 골수종세포는 HAT배지에서 생존할 수 없다.

참고 자료

신영오, 사람 유래 치료 항체의 제조 및 이용 (2009), 1.
한국약학교육협의회 병태생리학분과회, 병태생리학(제9판), 범문에듀케이션 (2017), 90-92.
DeOca Kayla B. et al., Low-Zone IL-2 Signaling: Fusion Proteins Containing Linked CD25 and IL-2 Domains Sustain Tolerogenic Vaccination in vivo and Promote Dominance of FOXP3+ Tregs in vitro, 11 Front. Immunol. (2020).
https://www.creative-diagnostics.com/polyclonal-vs-monoclonal-antibodies.htm