Animal cell culture 세포배양 / 100점 면역학실험 레포트 (원리, 동결보존, 농도 계산, mammalian, hemocytometer)

소개글

100점 레포트 입니다!

세세한 내용도 많이 들어있습니다.
(stock 해동 시에 작은 얼음 알갱이 남기는 이유 등)

Animal cell을 이용하여 4가지 실험을 진행하였습니다.
1) Cell thawing (세포 해동)
2) Cell subculture (계대배양)
3) Cell counting
4) Cell stock (cryopreservation, 동결보존)

실험방법, 실험 및 시약의 원리, 비교/분석, counting 계산법 등을 포함합니다.

목차

1. introduction
1) cell line vs. primary cell
2) complete media의 구성성분
3) Cryopreservation에서 DMSO의 역할
4) Hemocytometer와 trypan blue의 원리, counting 기준, counting 계산법
5) T/EDTA의 역할과 cell detachment의 원리
6) FBS의 성분과 cell growth

2. Material
1) cell thawing
2) cell subculture
3) cell counting
4) cell stock

3. Method
1) cell thawing
2) cell subculture
3) cell counting
4) cell stock

4. Result
1) cell thawing : 사진 첨부
2) cell subculture : 사진 첨부
3) cell counting : cell 농도 계산

5. Discussion
1) Cell counting 시에 cell 농도 계산
2) Cell counting 결과가 조마다 다르게 나온 이유에 대한 고찰
3) Stock을 해동할 때 작은 얼음 알갱이를 남기는 이유
4) Cell 용액을 분주할 때 한 방울 씩 천천히 분주하는 이유에 대한 고찰
5) Adherent cell과 suspension cell의 차이 및 사용하는 배지가 다른 이유에 대한 고찰

6. References

본문내용

1.1) Cell line vs Primary Cell
Mammalian(animal) cell을 이용한 실험은 실제 생물체 내에서 이루어지는 in vivo 실험과 실험관 내에서 이루어지는 in vitro 실험으로 구분된다. in vitro 실험에서 이용하는 Cell은 Continuous Cell Line과 Primary Cell Culture로 나눌 수 있다.
Primary Cell Culture는 사람, 쥐 같은 생물체의 조직으로부터 직접 취한 세포를 의미한다. 세포를 조직으로부터 취할 때는 rinsing, dissection, mechanical or enzymatic disaggregation, seperation의 다소 복잡한 과정을 거친다. 조직으로부터 분리된 cell은 시간이 지남에 따라 자연스럽게 죽으므로 연속성이 없다.
세포가 죽을 때마다 매번 새롭게 채취하는 것은 연구자와 생물체 모두에게 번거롭다. 그리하여 연구실에서는 주로 Continuous Cell Line을 이용한다. Cell line은 죽지 않고 계속 자랄 수 있게 transformation 된 세포다. 이러한 transformation은 자연적으로 이루어지거나, 화학적으로 혹은 바이러스를 통해 유도될 수 있다. 연속성이 뛰어나다는 장점을 갖고 있지만, 실제 세포를 transformation한 세포이므로 실험 결과가 실제와 다를 수 있다. 또한 반복되는 세포 분열로 인해 돌연변이가 발생할 확률이 높다. 뛰어난 연속성은 암세포의 특징이기도 한데, 실제로 암세포를 살짝 변형하여 Cell Line을 만드는 경우도 있다.

1.2) Complete media의 구성 성분
배지는 세포가 자라는 데에 알맞은 pH와 osmotic pressure을 갖고 있으며 생장에 필요한 영양소, growth factors, 세포 성장을 위한 호르몬을 담고 있는 혼합물이다. Amino acid, vitamins, inorganic salts, glucose 그리고 buffer를 포함하는 배지를 basal medium(기본 배지)이라고 한다.

참고 자료

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