[실험프로토콜] mini-prep, plasmid DNA 추출

소개글

kit를 이용하지 않고 적은 양의 plasmide DNA르 추출하는 방법입니다.

그림으로 설명하여 간단하게 따라하실 수 있을 것입니다.

실험관련자료를 한번에 구입을 원하시거나 요구하는 프로토콜이 있으시면 문의주세요.

목차

1. Materials
2. Method
3. Using Materials (machine & accessory)

본문내용

Method
1. Overnight시킨 bacteria 1.5ml(3ml)를 1.5ml microcentrifuge tube에 넣음.
2. 3min동안 13,000rpm으로 centrifugation하여 cell harvest.
3. 120ul(240) TEG용액(solution 1)을 넣고 vortexing하여 섞어중.
4. 240ul(480) NaOH/SDS( 0.2M/1% : solution 2)를 더하고 tube를 조심히 inverting.
: NaOH(5M) = 20ul , 10% SDS = 50ul , d.d H20 = 430ul
5. 180ul(360) KOAc(3M : solution 3)를 넣고 tube를 조심히 inverting.
6. 얼음에 5min간 둠.
7. 10min, 4°C, centrifuge.
8. 상층액을 New 1.5ml microcentrifuge tube로 옮김.
9. 270ul(540) propanol(40C)을 넣음.
10. 15min, 4°C, centrifuge.
11. 상층액을 버림.
12. 얻어진 pellet에 500ul EtOH(70%)를 넣음.
13. vc>rtexing하여 씻어준 후, 15min, 4°C, centrifuge.
14. 얻어진 pellet을 5min동안 vaccum dry.
15. TE 200ul에 용해시킴.
16. RNase(DNase-free : 10mg/ml) 5ul를 넣음.
17. 30min동안 RT, incubation.
18. 같은 양만큼(200ul)의 phenol을 넣고 vortex하여 잘 섞어중.
19. 2min, centrifuge
20. 상층액을 New 1.5ml microcentrifuge tube로 옮김.
21. 같은 양만큼(200ul)의 chloroforn/isoamylalcohol을 넣고 vortex하여 잘 섞어중.
22. 2min, centrifuge.

참고 자료

없음