[A+레포트] DNA 농도 측정 및 플라스미드 (plasmid), 전기영동법 (gel electrophorosis)

소개글

A+ 받은 자료로, DNA 농도 측정, 플라스미드, 겔 전기영동 등 DNA 분리 및 측정과 관련된 내용을 아주 꼼꼼하고 충실하게 작성한 레포트입니다.
중간,기말 시험 대비용 자료로도 훌륭하고, 레포트 작성에 큰 도움이 되실것입니다.

목차

1. 주제
2. 재료 및 기구
3. 실험목적 및 원리
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 이론
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

1) Plasmid DNA 분리 (이온 교환 크로마토 그래피)
형질전환 된 E.Coli cell로부터 plasmid DNA를 재분리 하고자 하는 실험으로서, plasmid preparation method에는 alkali lysis법, boiling법, 효소 분해법 등이 있다.
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재하는 내성유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택배지에서 균주를 배양하면, 플라즈미드를 갖고 있는 형질전환 균주는 항생물질이 존재하는 배지에서 살아남는다. 이 형질전환 균주를 액체 배지상에서 적당한 세포수로 배양한 후 회수해 플라스 미드를 얻는다. 세포를 끓이거나, 알칼리 상태에 둘 경우 세포가 용해되면서 세포 내에 존재하는 플라스미드가 세포 밖 수용액상에 나오게 된다. 이것을 원심분리를 통해 세포 잔여물을 제거하면 플라스미드가 다량 녹아 있는 수용액을 얻을 수 있다. 이 수용액에 에틸알코올이나 이소프로필 알코올을 처리하면 DNA가 침전되며 침전된 DNA를 적당한 완충용액에 녹임으로써 플라스미드 DNA를 정제할 수 있다.
혹은 이온 교환 크로마토 그래피 법을 이용하여 보다 순수한 plasmid DNA를 정제할 수도 있다.

<중 략>

이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 세포 추출물에서 DNA 정제
생화학자들은 화학 혼합물을 각각의 개별 성분으로 분리하기 위해 전하량(electrical charge)의 차이를 이용한 다양한 방법들을 고안했다. 이러한 방법 중 하나가 크로마토그래피 이온 교환 수지(resin)의 전기를 띈 입자에 얼마나 강하게 붙느냐에 따라 분자를 분리하는 이온교환 크로마토그래피이다. DNA와 RNA는 몇몇 단백질과 같이 음전하를 가지고 있어 양전하수지(resin)에 결합한다. 전기적인 결합은 염에 의해 분리되는데, 강력하게 결합된 분자들을 분리하기 위해서는 고농도의 염이 요구된다. 염의 농도를 점차적으로 증가함으로써 다양한 종류의 분자들이 차례로 수지(resin)로부터 분리된다.
이온 교환 크로마토그래피를 수행하기 위한 가장 간단한 방법은 유리나 플라스틱 관에 수지를 넣고 세포 추출물을 위해서 붓는 방법이다.

참고 자료

식품영양실험핸드북, 한국 식품영양 과학회, 효일, 2000.
실험 생화학, 한국생화학회, 탐구당, 1997.
김정국 외, 유전자 클로닝과 DNA 분석 입문서, 월드사이언스, 2006.
한국유전학회 실험서 집필위원회, 유전학실험서, 라이프사이언스, 2004.