PCR의 원리를 이용하여 젤 전기영동을 후 DNA map 작성 결과를 분석하는 실험 레포트 입니다.

소개글

PCR의 원리를 이용하여 젤 전기영동을 후 DNA map 을 그리고 분석하는 실험 레포트 입니다.

목차

2. Subject PCR (Polymerase Chanin Reaction) and Enzyme reaction
3. Purpose
4. Introduction
5. Material and Procedure
6. Result
7. Discussion
8. Reference

본문내용

2. Subject PCR (Polymerase Chanin Reaction) and Enzyme reaction

3. Purpose PCR의 원리를 알고 직접 사용하여 보고 젤 전기영동을 통해 결과를 분석한다. 제한효소의 역할을 알고 이것을 이용하여 DNA를 자른 후 map을 작성한다.

4. Introduction
PCR(중합효소 연쇄반응)이란 DNA 조각이 증폭되는 기술을 말하는데 이는 1983년 Kary Mullis에 의해 고안 되었다. 이것을 통해 과학자들은 미량의 혈액 및 조각으로부터 DNA 지문분석을 위한 대량의 DNA를 얻어낼 수 있다.
PCR의 원리는 간단하다. PCR에서 뜨거운 온천물에서 사는 원핵 생물로부터 얻은 특이한 DNA 중합효소가 필요하다. 다른 단백질과 달리 이 효소는 PCR과정 중에서 DNA가닥의 분리를 위한 고온 처리 과정을 견뎌낸다. 증폭할 DNA 샘플을 이 특이한 DNA 중합효소와 뉴클레오티드 단량체, 그리고 DNA 복제 시 프라이머로 작용하는 작은 조각의 DNA와 섞어서 열처리를 한다. 이 혼합 상태에서 DNA가 복제되고 2개의 새로운 DNA가닥이 생기게 되며 이 새로운 DNA는 열에 의해 다시 가닥의 분리, 복제가 일어나고 일련의 과정이 계속 반복된다. 한번 복제 시 DNA의 양은 2배로 늘어나게 되고 한 DNA분자는 몇 시간 정도의 PCR 과정을 통해 1000억 개 이상의 DNA분자를 얻을 수 있다. 1)
PCR 증폭반응의 현상은 다음과 같다. 효소를 primer가 결합된 DNA에 첨가하고 새로운 상보적인 가닥을 합성시키기 위해 반응시킨다. 그리고 나서 새롭게 합성된 가닥을 주형으로부터 분리시키기 위해 그 혼합액을 94℃로 가열시킨다. 그리고 primer들이 새롭게 합성된 가닥을 포함하여 각각의 위치에 혼성화되도록 하기 위해 냉각시킨다. 이제 Taq polymerase는 두 번째 DNA합성반응을 수행하게 된다. Denaturation-hybridization-synthesis로 구성된 cycle을 반복 수행한다(대개 25-30번). 그 결과 증폭된 DNA 단편의 수많은 copy들이 합성된다.

참고 자료

Campbell, Reece, Simon, Cambell 생명과학, 월드사이언스, , 226p~227p
양재섭 외 공역,필수유전학, 월드사이언스, 2005, 408~414p
서한극, 배양세포실험 핸드북, 월드 사이언스, 55~61p
곽동미(워싱텅주립대학교 수의학과 대학) 논문, Babesia equi ema-1 5` intergenic 뉴클레오타이드의 프로모터 위치 확인 : PCR 증폭 및 제한효소지도, 2004.2.2. 게재승인 2004.3.15