DNA plasmid preparation 에 필요한 solution 각각의 역할

소개글

DNA Plasmid preparaion 유전 실험에 필요한 solution의 각각 조성과 reagent의 역할 에 대한 리포트

목차

✪ LB broth with antibiotics
✪ STE Buffer
✪ Alkaline lysis buffer Ⅰ
✪ Alkaline lysis buffer Ⅱ
✪ Alkaline lysis buffer Ⅲ
✪ PCI solution

본문내용

✪ LB broth with antibiotics
① 10 grams tryptone
② 5 grams of yeast extract
③ 10 grams of NaCl
④ Dissolve in 1 L of water

bacteria를 배양하기 위한 액체배지이고 antibiotics는 실험자 가 원하는 plasmid를 얻기 위해 사용된다. antibiotics는 vector 에 존재하는 antibiotic resistance gene 에 따라 결정된다.

✪ STE Buffer
① 10 mM Tris-Cl (pH 8.0)
② 0.1 M NaCl
③ 1 mM EDTA (pH 8.0)

NaCl은 핵산과 결합하여 DNA를 안정화시키는 역할을 하고, TE buffer는 buffer로써의 역할을 한다.
TE buffer : Tris는 buffer 역할을 하고, EDTA는 극소량의 DNase로부터 DNA를 보호하는데, 두 시약의 조합이 바로 TE buffer 이다. 실험에서 물처럼 이용하는 것이 TE라고 할 수 있다.


✪ Alkaline lysis buffer Ⅰ
①50 mM glucose
②25 mM Tris-Cl, pH 8.0
③10 mM EDTA

EDTA는 세포벽의 integrity를 유지하는 데 필수적인 calcium ion을 제거하여 세포벽이 군데군데 무너지게 한다. 이때 glucose는 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지시켜 준다. 실험상 vortex를 해야 하는데 이때 세포가 완전히 깨지게 되면 chromosomal DNA가 잘게 깨지게 되어 plasmid DNA와 구분할 수 없게 된다. 따라서 이렇게 세포를 유지시켜가면서 세포벽만 깨는 것이 중요하다.

참고 자료

1. http://biochemistry.yonsei.ac.kr/ - DNA preparation
2. hrrp://www.genehunters.co.kr
3. 네이버 지식인 : EtOH ppt 및 PCI/CI extraction 하는 이유좀 알려주세요~(내공多)
4. http://tong.nate.com/joajin/19265479 - DNA 유기추출