[미생물학]DNA isolation of Gram Negative Bacteria

소개글

미생물학 실습 결과 레포트 입니다.
그람 음성 세균에서 DNA 분리에 관한 실험임.

목차

1. 제목 :
2. 실험 일자 :
3. 목적 :
4. 재료 :
5. 방법 :
6. 결과
7. 토의
8. 참고 문헌

본문내용

1. 제목 : DNA isolation of Gram Negative Bacteria
-Promega : Wizard Genomic DNA purification Kit

2. 실험 일자 : 2005년 9월 29일 목요일. 맑음.

3. 목적 : 세균 세포 배양액에서 순수한 DNA를 추출한 뒤 전기영동 할 수 있다.

4. 재료 :
․ 시액 : 균배양액, EDTA용액, Nucleic lysis solution, RNase solution, Protein precipitation solution, Isopropanol, 70% EtOH, DNA Rehydration solution
․ 실험 기구 : ice box, micro tube, micro pipet, 원심분리기, Dry oven, absorbent paper, incubator, agarose gel mold, comb, electrophoresis tank, test tube, 피펫, 자외선 lamp 및 사진장치

5. 방법 :
1. 1.5㎖ tube에 균 배양액 1㎖를 넣고 13000~16000rpm에서 2분간 원심분리 후 상층액은 버린다. 여러번 반복하여 균 수집이 많이 이루어 지도록 한다.
2. Nucleic lysis solution 600㎕ 첨가 후 재현탁 시킨다.(by pipetting) 계면활성제를 써서 세포막을 파괴는 과정으로, pipetting을 세게하면 거품이 발생하므로 주의한다.
3. 5분 동안 80°C에 방치시켜 cell을 용균시킨다. 그 후 실온에서 식힌다.
4. cell lysate에 RNase solution 5㎕를 첨가한다. 혼합하기 위해 2~5번 inversion 한다. RNase로 RNA를 제거하는 과정이다.
5. 15~60분 동안(20분) 37°C에서 방치하고 sample을 실온에서 식힌다.
6. RNase 처리한 cell lysate 에 Protein precipitation solution 200㎕를 넣는다.

참고 자료

종합미생물학 미생물면역분과위원회 신일상사 2005년
최신실험미생물학 미생물 및 면역학 분과회 신일상사 2001년
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