[생명과학] RNA 분리(동물세포)

목차

-introduction
-material & methods
-result
-discussion
-reference

본문내용

>>RNA의 분리

포유동물세포는 약 10-5ug의 RNA를 함유하고 있는데, 이중 80∼85%는 ribosomal RNA(주로 28S, 18S, 5S)이고 10∼15%는 transfer RNA, small nuclear RNA 등 이다. 이런 RNA들은 제각기 정해진 크기와 일정한 염기배열 순서로 되어 있으며 electrophoresis나 density gradient centrifugation 혹은 ion exchange chromatography등의 방법으로 순수 분리할 수 있다.
반면 mRNA는 세포내 전체 RNA중 1∼5% 정도를 차지하고 있으며 크기(수백 개~수천 개 염기)와 염기배열 순서가 다양하다. 그러나 거의 모든 포유동물의 mRNA에는 3'쪽 끝에 poly(A) tail이 있어 oligo(dT) cellulose를 이용한 affinity chromatography로 순수 분리할 수 있다.

3. Methods

① Add the easy-blue solution 1ml
② Cell harvest by scrapper immediately
③ Transfer the solution into the e-tube and vortex vigorously
④ Add the chloroform 200ul and vortex vigorously
⑤ Centrifuge at 12000rpm for 10min.
⑥ Transfer upper layer 350ul into new tube
⑦ Add isopropanol 350ul and invert gently
⑧ Centrifuge at 1200rpm for 5min.
⑨ Remove supernatant save pellet

참고 자료

http://biochemistry.yonsei.ac.kr