RT-PCR 레포트

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최초 등록일: 2023.12.13
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PCR(polymerase chain reaction)은 중합효소 연쇄반응이라고 하며 소량의 시료만으로도 DNA를 증폭시켜 대량의 표적 유전 정보 물질을 얻을 수 있는 방법이다. DNA의 특정 부분을 복제•증폭시키기 위한 기법이다. 1985년 미국의 생화학자인 캐리 멀리스(Kary B. Mullis)에 의해 개발되었으며 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에서 사용되고 있을 정도로 생명과학 분야에서 필수적으로 이용되는 기법이다. 또한 최근 전세계를 펜데믹으로 이끌고 간 코로나-19를 검출하기 위한 방법으로 PCR 기법을 사용함으로써 더욱 널리 알려졌으며 RNA 바이러스를 검출하기 위해 역전사 반응을 시행하는 RT-PCR(코로나19 검사법 또한 이 방법에 해당), 형광 물질을 사용하여 DNA와 함께 증폭산물을 동시에 검출하는 실시간 PCR 등 다양하게 변형하여 이용하고 있다. PCR은 크게 3단계로 변성(Denaturation), 결합(Annealing), 신장(Elongation)으로 나눌 수 있다. 위에서 언급한 것처럼 변성 단계에서 이중나선 구조인 DNA를 분리하여 프라이머를 결합하는 단계를 거쳐 DNA 중합효소를 이용하여 DNA를 합성하여 DNA 가닥을 복제하는 과정을 수행자가 정한 횟수만큼 반복한다. 이에 따라 지정 영역의 DNA를 2ⁿ배만큼 증폭시키게 되어 소량의 시료만으로도 대량의 결과물을 얻을 수 있는 것이다. 그중 이번에 실시할 RT-PCR은 1-step RT-PCR과 2-step RT-PCR로 나뉘는데 1-step RT-PCR은 PCR을 진행할 때 역전사 효소를 넣어 역전사 반응과 DNA 중합효소 반응이 일어나느 방법으로 오염의 확률이 적고 2-step에 비해 시간이 짧게 소요되지만 RNA는 보관 시 변이의 가능성이 크기 때문에 나중에 분석할 때에는 적합하지 않다. 2-step RT-PCR은 은 RNA를 cDNA로 합성한 뒤 독립된 실험으로 PCR을 동일하게 진행하는 방법으로 반복 실험을 진행

참고 자료

생명과학대사전
서울대학교 병원 의학정보
시사상식사전

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