reverse transcriptase and real-time PCR 예비 레포트 ( A 학점)

소개글

reverse transcriptase and real-time PCR 예비 레포트 ( A 학점)

목차

1. Avian Myeloblastosis Virus reverse transcriptase를 이용하여 오늘 분리한 RNA로부터 cDNA를 합성하 고자 한다. 반응에 필요한 실험 재료와 프로토콜을 추천하시오.
2. SYBR® Green real-time PCR과 TaqMan® real-time PCR의 원리를 설명하고, 장단점을 비교하시오.
3. Delta Delta Ct method를 이용한 real-time PCR의 정량원리를 설명하시오.

본문내용

1. Avian Myeloblastosis Virus reverse transcriptase를 이용하여 오늘 분리한 RNA로부터 cDNA를 합성하 고자 한다. 반응에 필요한 실험 재료와 프로토콜을 추천하시오.1)2)
<Reverse transcription 프로토콜>
1. RNA 샘플을 변성시킨다.
Primer(50ng/μl random hexamer) 1 μl
RNA(10pg-5μg) x μl
10mM dNTP 2 μl
DEPC-treated water to 12μl

<중 략>

2. SYBR® Green real-time PCR과 TaqMan® real-time PCR의 원리를 설명하고, 장단점을 비교하시오.2)
TaqMan 기반 검출법은 PCR 동안 축적되는 타겟 유전자에 특이적인 형광 탐침을 사용하여 타겟 유전자를 검출한다. SYBR 그린 기반 검출법은 SYBR 그린 염료(dSDNA 결합 염료)를 사용하여 PCR동안 축적되는 PCR 산물을 검출한다.

참고 자료

Reverse Transcription PCR (https://www.youtube.com/watch?v=qmACKSvFZpM)
ThermoFisher, “Reverse Transcription Setup”, https://www.thermofisher.com/kr/
ko/home/life-science/cloning/cloning-learning-center/invitrogen-school-of-molecular-biology/rt-education/reverse-transcription-setup.html
Real-Time PCR을 위한 TaqMan과 SYBR 화학 비교https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learningcenter/real-time-pcr-basics/taqman-vs-sybr-chemistry-real-time-pcr.html