[면역학실습] NO assay와 ELISA를 이용한 resveratrol의 항염증 효과 확인 (상)

소개글

같은 실험이 2주차에 걸쳐 진행되어 리포트가 (상)편과 (하)편으로 구성되어 있습니다.
(상)편은 cell treatment까지 다룹니다.
(하)편은 NO assay와 ELISA를 진행합니다.

목차

Ⅰ Introduction
1. Resveratrol
2. Macrophages
3. RAW 264.7

Ⅱ Protocol
1. Cell seeding
2. Cell treat

Ⅲ Results
1. cell 용액 제조
2. resveratrol 용액 제조
3. LPS 용액 제조

Ⅳ Discussion

Ⅴ Assignments
LPS를 처리하는 이유

Ⅵ References

Ⅶ Pre-study
1. NO assay의 원리
2. ELISA의 목적과 원리

본문내용

Ⅰ Introduction

1. Resveratrol
Resveratrol은 식물이 만들어내는 폴리페놀계 물질이다. 포도껍질, 포도씨, 땅콩, 오디 등에 존재한다. 물에는 녹지 않고 알코올에 잘 녹는 성질이 있다. 항암, 항바이러스, 신경보호, 항노화, 항염, 수명연장 등의 효과가 있다.


2. Macrophages
대식세포는 PRR(pattern recognition receptor)를 통해 외부 항원을 인식한다. 그람 음성균의 외막에 존재하는 LPS(lipopolysaccharide)는 내독소이며 대식세포의 TLR4을 통해 인식된다. 그러면 일련의 신호전달 경로를 거친다. 먼저 TLR의 cytosolic side에 있는 TIR 도메인이 adaptor 역할의 MyD88과 결합하고 IRAK1/IRAK4 복합체 형성이 유도된다. IRAK1는 IRAK4에 의해 인산화되고 TRAF6과 결합한다. IRAK1-TRAF6 복합체의 해리는 TAK1을 활성화시킨다. 활성화된 TAK1은 IKK를 인산화시켜 NF-κB 경로를 활성화시킨다. NF-κB는 평소 IκB에 의해 억제된 상태로 있다가 활성화되면 전사인자로 작동한다. 또한, 활성화된 TAK1은 MAPK도 인산화하여 활성화시키고 MAPK 의존 유전자의 전사가 촉진된다. 이렇게 LPS 자극에 의해 대식세포가 활성화되면 NO와 활성산소종을 분비하거나 IL-6과 TNF-α와 같은 pro-inflammatory cytokine을 분비하여 염증 반응을 매개한다. 이번 4주차 실험은 다음 5주차 실험과 이어지며, 대식세포에 resveratrol을 투여하면 NO 및 사이토카인 분비 감소를 보이는지 관찰함으로써 resveratrol의 항염증 효과를 확인한다.

참고 자료

감염미생물·면역약학 분과학회, 최신면역학
Park, Kyung-Il. “Variation of Nitric Oxide Concentrations in Response to Shaking Stress in the Manila Clam Ruditapes Philippinarum.” The Korean Journal of Malacology. The Malacological Society of Korea, March 31, 2013. doi:10.9710/kjm.2013.29.1.1.
https://www.quimigen.com/nitric-oxide-2651/nitric-oxide-detection-kit-500-679000373.html