[생물공정실험] 2주차 RNA extraction and quantification 결과보고서

목차

1. 실험방법
2. 실험결과 및 해석
3. 고찰
4. 참고문헌

본문내용

이번 실험을 통해 EGFP가 있는 세포와 EGFP가 없는 세포에 Trizol을 처리한 후 RNA를 정 제하여 nano drop을 이용해 농도와 순도를 알아보았다. 먼저 Trizol, phenol, GITC를 사용 해 homogenization을 진행해야하는데 사전에 준비되어 있었다. Trizol은 phenol+guanidine isothiocyanate로 구성되어 산성 phenol(pH4)으로 단백질과 지질을 분해하여 세포막과 세포 내 미세기관들을 파괴하고 RNA만 선택적으로 분리할 수 있게 한다. 동시에 GITC(guanidine isothiocyanate)로 Rnase를 억제하기 위해 쓰였다. 이때 phenol은 강한 산성으로 DNA를 파 괴(depurination)하지만 RNA는 안정(depurination)하다. DNA는 변성되면 chloroform층으 로 녹아들어간다. 완충액과 함께 조직이나 세포를 균질화하고 균질화된 용액을 원심분리하면 밀도가 낮은 지방, 단백질 등은 상층부에 뜨며 DNA는 중간 부위에 그리고 가장 밀도가 높은 RNA가 바닥에 침전되도록 하여 순수 RNA를 정제한다.

참고 자료

Measuring RNA with NanoDrop – Protocol Place
RNA를 이용한 분자생물학적 연구, 충남대학교 의과대학 내과학교실, 이강욱