서강대학교 현생실2 DNA의 Ligation과 Transformation, Plasmid DNA의 Mini-scale preparation과 제한효소 처리 후 젤 전기영동

소개글

"서강대학교 현생실2 DNA의 Ligation과 Transformation, Plasmid DNA의 Mini-scale preparation과 제한효소 처리 후 젤 전기영동"에 대한 내용입니다.

목차

I. Abstract

II. Introduction

III. Materials and Methods
1. DNA Ligation
2. Transformation
3. Miniscale-preparation
4. 제한효소처리

IV. Data & Results

V. Discussion

본문내용

 Abstract
이번 실험에서는 DNA ligation을 통해 이전 실험에서 제한효소 처리한 Insert DNA를 pET-21a Vector에 삽입하고, Ligation 결과물을 Competent cell에 열 충격 방법으로 형질전환 한 뒤 Ampicillin 항생제를 포함한 LB plate에서 Colony selection을 진행했다. DNA ligation은 DNA 양 끝의 상보적인 결합으로 일어나게 되며, Phosphodiester bond를 형성하는 T4 DNA ligase의 작용으로 진행된다. Ligation과정 중 한 분자 내에서 발생할 수 있는 Self-ligation이 일어나지 않도록 주의해야 한다. Ligation 후 열충격으로 형질전환 시킨 Sample을 Vector only(pET-21a(+))와 Vector + Insert plate 두개로 나눠 LB-Ampicillin agar plate에 분주해 원하는 Sample만을 채취한다. 그 후 Colony에서 얻은 Bacteria에서 Mini-scale preparation으로 plasmid DNA를 Kit 방법으로 추출하고 정제하며, Hindlll와 Ndel 제한효소의 처리로 Insert DNA 부분을 절단해 Agarose gel electrophoresis로 분리하여 그 Band를 관찰한다. LB plate에서, Vector only의 경우 한 개의 Colony, Vector + Insert 에서는 Colony가 보이지 않았는데, 이는 여러 실험적 이유로 나타난 잘못된 결과일 수 있다. Preparation 후 전기 영동 한 결과에서는 Vector와 Insert DNA가 5443bp와 750bp에서 잘 나타났다. 실험적 오류로 인한 Colony 미생성에 관해 고찰해보고, 다른 Selection 방법에 관하여 생각해보았다.

 Introduction
DNA ligase는 Ligase라는 효소 중 하나로..

<중 략>

참고 자료

Pascal JM, O'Brien PJ, Tomkinson AE, Ellenberger T (November 2004). "Human DNA ligase I completely encircles and partially unwinds nicked DNA". Nature. 432 (7016): pp473-478.
"Cloning Guide". New England Biolabs Inc.
Bouchard, Roland; et al. (2010). Laboratory Methods in Microbiology. Universal Scientific. pp119–126.
Ehrlich GK, Berthold W, and Bailon P. Phage display technology. Affinity selection by biopanning. Methods in molecular biology. 2000. 147:195-208
Mandecki W, Chen YC, and Grihalde N. A Mathematical Model for Biopanning (Affinity Selection) Using Peptide Libraries on Filamentous Phage. Journal of theoretical biology. 1995. 176:523-530
Smith GP, and Scott JK. Libraries of peptides and proteins displayed on filamentous phage. Methods in Enzymology. 1993. 217:228-257