효소 면역 분석법 표준작업지시서

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목차

1. 개요 3
2. 목적 3
3. 용어 정의 3
4. 시험법 및 준비사항 3
5. ELISA(효소면역분석법) 측정 8
6. 시험결과 기록 11
7. 유효성 검증방법 12

본문내용

5.2 세포독성과 항염 세포 배양
5.2.1 세포 준비
(1) Water bath를 37℃로 맞춘 후, 배지를 약 10분정도 녹인다.
(2) 클린벤치 내에서 플레이트에 부착되어 있는 세포를 마이크로파이펫을 이용하여 Washing해준다.
(3) Washing 후 마이크로 파이펫을 이용하여 15ml 튜브로 옮긴다.
(4) 원심분리기를 사용하여 세포를 침전시켜 상등액과 분리시킨다.
(5) 상등액을 버리고 새로운 배지 3ml을 넣은 뒤 마이크로 파이펫을 이용하여 세포를 풀어준다.
(6) 새 배지 7ml를 추가하여 총 용량을 10ml로 맞춰준 뒤 뚜껑을 닫고 위아래로 흔들어준다.
5.2.2 세포 계대
（1）헤마사이토미터에 10 L 분주 후 자동 세포 계수기를 이용하여 세포 수를 측정한다.
계산법
필요양 / 측정양 × 필요용량 × 10 (각 well당 100ul (10배X))
(필요양: 1.0× 10^5 / 측정양: 2.71 × 10^6 /ml / 필요용량: 10)
∴3.7ml
5.2.3 세포 분주
(1) 위 계산법으로 조제한 용액을 15mL Tube에 3.7ml 넣은 후 6.3mL(10-3.7)만큼 새 배지를 첨가한다. 그 후 뚜껑을 닫고 위아래로 흔들어준다.
(2) reservoir에 조제한 용액을 옮겨 담는다.
(3) 멀티 파이펫을 이용하여 100 L씩 96Well 플레이트에 분주한다.
(기포방지를 위하여 피펫팅을 3번 이상 진행한 후 시료를 분주한다.)
(4) 96Well 뚜껑을 닫은 후 조/날짜를 기입한 후 CO2 인큐베이터에서 배양한다.

5.2.4 세포독성과 항염 시료 제조
최대농도 원액농도
50 /ml 50mg/ml
Ⓐ (최대농도) in 10ul
* (20x) = (최대농도)(20x)ug in 10ul
Ⓑ 원액농도 / 실험농도 = ( X)
Ⓒ 필요량 100 l / ( X) = 원액의 양

참고 자료

없음