효모 형질전환 Yeast transformation 예비보고서

소개글

효모 형질전환에 대한 레포트입니다.
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목차

1. 실험이론
1) Homologous recombination(상동재조합)
① recombination(재조합) 이란?
② Homologous recombination(상동 재조합) 이란?
③ Homologous recombination(상동 재조합)의 역할
④ Homologous recombination(상동 재조합)의 이번 실험에서의 역활
2) Yeast transformation(종류, 원리, 방법, 재료)
①Yeast transformation의 종류 및 원리
a. DNA transformation into yeast: lithium acetate method
b. DNA transformation into yeast: spheroplast method
c. Yeast Electroporation
②Yeast transformation의 방법
*DNA transformation into yeast : lithium acetate method
③Yeast transformation의 재료
3) YPD media
① YPD media란?
② YPD media 만드는 protocol (1L 고체 YPD media 기준)
③ 왜 Agar를 넣는가?
4) trasnformant selection(형질 전환체 선택) 방법(원리)
① Selectable marker란?
② 이번 실험에서의 selectable marker의 역할?
5) PCR purification
① PCR purification protocol
② PCR purification meterial

2. 참고문헌

본문내용

1. 실험이론

1) Homologous recombination(상동재조합)

① recombination(재조합) 이란?
재조합의 핵심은 DNA분자의 절단과 곧 이어지는 재연결이다. 지금은 poly nucleotide의 절단과 재결합에 관여하는 여러 가지 과정을 recombination이라 부른다. Recombinaion은 homologous recombination, site-specific recombination, transposition을 포함한다.

② Homologous recombination(상동 재조합) 이란?
Homologous recombination은 general recombination으로도 불린다. 이것은 염기서열의 상동성이 매우 높은 DNA분자조각 사이에서 일어난다. 이 조각은 다른 염색체상에 존재할수도 있고 하나의 염색체의 서로 다른 두 부분일수도 있다. 옆의 그림은 sister chromatids의 homologous recombination이다. Sister chromatids의 같은 sequence를 가진 부분이 recombination 된것을 볼수 있다.

<중 략>

② PCR purification meterial
a. PB buffer : 용액에 chaotrophic reagent(high salt)를 첨가할 경우 negative charge를 띤 DNA는 positive charge를 띤 matrix에 비특이적으로 부착한다. 보통 matrix는 silica성분으로 이루어진 재질이다. PB buffer는 PBBuffer는NaH2PO4와 Na2HPO4로 이루어져 있으며 다량의 sodium ion를 수용액 내에 방출한다.
b. NW buffer : 70% Ethanol이 들어가 있어서 PCR mix 에 있던 다른 물질들과 saltf를 씻어내린다. Ethanol은 물보다 더 비극성인 용매라서 sodium 이온을 녹여서 밑으로 씻어내려가게 하지 못하지만 다양한 hydrophobic sites와 hydrophilic sites를 갖고 있는 효소들을 밑으로 걸러지게 한다. 결국 DNA만 silica membrane에 결합한 채로 남아 있다.

참고 자료

Genomes 3 유전체 분자생물학 / 이동희 외 / 월드 사이언스 / 2008
왓슨 분자생물학 6판 / 저자 Watson 외 / 바이오 사이언스 / 2010
http://en.wikipedia.org/wiki/Homologous_recombination
http://www.addgene.org/vector-database/3972/