예비5 Liquid culture & Expression 김

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목차

1. 실험 목적

2. 바탕 이론
1) 세포 배양
2) 세포 성장 곡선 (Cell Growth Curve)
3) O.D (Optical Density)
4) Lac Operon(락토스 오페론)

3. 기구 및 시약
1) 실험 기구
2) 실험 시약

4. 실험 방법

5. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
본 실험은 액체 배지를 활용하여 형질전환을 통해 유전자 조작된 세포(eGFP DNA 포함)를 배양한다. 후에 배양된 세포에 IPTG를 첨가하여 단백질 발현을 유도하는 실험이다. IPTG는 단백질 발현 과정에서 유도물질로 조절 유전자에서 발현된 억제물질이 작동유전자에 결합하여 전사를 방해하는 현상을 막아주는 유도체 역할을 한다. 결과적으로 이를 통해 특정 단백질의 적절한 발현을 유도할 수 있다. IPTG 투입은 Cell Growth Curve에 미생물의 성장 속도가 급속도로 빨라지는 대수기에 투입하는데, 이 때 O.D 0.6~0.8는 해당한다.

2. 바탕 이론
①세포 배양
세포 배양은 일반적으로 동물과 같은 다세포 생물에서 특정 세포를 추출하여, 외부에서 증식시키는 생명공학에서 유용한 기술이다. 배양은 배양 세포의 형태에 따라 접착 배양계 세포와 부유 배양계 세포로 분류된다.
접착 배양계 세포의 경우, 배양 용기에 부착하여 배양을 실시하여 증식시키는 형태의 세포이고, 이는 주시적으로 새배지에 이식시켜 균주를 보관하는 계대배양(Subcultury)에서 배양지를 계대 시에 교환해주어야 한다.

참고 자료

‘2020년 생물 화공 실험 이론 및 실험’ 실험노트
Willey, Sherwood, Woolverton, ‘미생물학 제9판’, 2006, (주)라이프사이언스, p137~172, p358~371
Benjamin A. Pierce, ‘유전학의 의해 개념과 원리 제 6판’, 2017, (주) 라이사이언스, p250~260
오계헌 외 4명, ‘최신 미생물학 실험 제 2판’, 2010, 신광문화사, p210~220
Rain M, Maier 외 2명, ‘환경미생물학’, 2004, 동화기술교역, p45~50