IPTG induction (expression)관련 레포트 (A+받은자료)
- 최초 등록일
- 2020.07.08
- 최종 저작일
- 2019.04
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소개글
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목차
1. IPTG induction (expression)
2. IPTG induction 시 expression이 되지 않는 경우
3. 참고내용
본문내용
IPTG란 무엇인가?
IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)는 allolactose와 분자적으로 유사하며 젖당 대사물로서 lac operon의 전사를 개시한다. 그리고 유전자가 lac operon의 효소합성을 유도하는 유도물질이라 말할 수 있으며 단백질 발현을 유도하는데 쓰인다. 그리고IPTG는 β-galactosidase의 활성을 유도하는 물질이다. 따라서 lacz 결손세포를 숙주로 하여 pUC계 plasmid vector DNA를 형질전활 할때나 M13 phage vector DNA를 형질 도입할 때 배지에 IPTG와 X-gal을 첨가하여 놓으면 β-galactosidase의 α-상보성에 의한 발색의 유무로 재조합체를 선택할 수 있다. 또 lac promoter 나 tac promoter를 갖는 발현 vector의 발현 유도체로써 사용한다.
우리가 사용한 plasmid vector는 pET vector인데 pET vector를 E.coli외의 균주에서 단백질 발현용으로 사용하려면 pET vector의 ori가 발현 균주에서 인식되어야 한다. 그리고 BL21(DE3)는 IPTG가 있으면 발현을 잘할 수 있고 BL21(DE3)가 아니라면 T7 RNA polymerase가 생산되는 균주여야지 발현이 가능하게 된다. 따라서 BL21(DE3)가 아닌 균주에서 pET vector가 작동하려면 균주에서 T7 polymerase가 생산되면 가능하게 된다.
우리가 사용한 BL21(DE3)는 lac operon 시스템을 가지고 있다. 젖당이 없을 때는 lac repressor가 프로모터에 결합해서 유전사 전사를 막게된다. 그러나 포도당이 없고 젖당이 있는 상태에서는 lac repressor에 젖당 유도체가 결합해서 lac repressor가 비활성화(inactive)된다. 그렇기 때문에 promoter에 downstream의 유전자들이 전사될 수 있다.
참고 자료
https://blog.naver.com/hoyoon13/220373975702
https://blog.naver.com/hafs_snu/221432886630
https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=661807&ksr=1&FindText=pET BL21
