AP-staining Report

목차

1. Introduction
2. Material & Method
3. Result
4. Discussion

본문내용

* 실험 목적
: Stem cell의 pluripotency를 검증하기 위해 AP staining 방법을 사용해 확인한다.

* Alkaline phosphatase staining
Alkaline phosphatase staining은 stem cells가 미분화되어 pluripotency를 가지고 있는지 검증하는 염색법이다. 이 AP staining의 원리를 각 solution의 성분들의 화학적 반응을 중심으로 알아보았다. AP staining solution에 들어있는 sodium nitrite solution과 FRV-alkaline solution의 두 분자들의 질소원자들이 반응하면 Azo group이라는 공명구조를 이룬다. 이 azo group의 diazotization으로 sodium nitrite와 FRV-alkaline의 diazo compound가 만들어지는데 이 화합물은 반응성이 큰 특징이 있고 다른 분자와 반응해 발색을 띤다.
Naphthol AS-BI alkaline은 Figure 1을 참고해보면 구조식 아래에 인산기를 확인할 수 있다. 이 인산기의 결합이 세포에 존재하는 alkaline phosphatase에 의해 끊어지게 되면 아까 만들어진 sodium nitrite와 FRV-alkaline의 화합물과 복합체를 이루게 된다. 이 복합체가 육안으로 관찰 가능한 빨간색을 띠므로 빨간 복합체를 관찰하는 것을 통해 세포의 alkaline phosphatase의 활성을 알 수 있게 된다.
Alkaline phosphatase는 모든 세포에 존재하지만 일반 세포는 alkaline phosphatase의 발현이 적어 naphthol AS-BI alkaline의 인산기 결합을 끊는 인산가수분해 반응이 바로 나타나지 않고 시간이 걸린다.

참고 자료

“알칼리포스파타제 염색”, 간호학대사전
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=505380&cid=60408&categoryId=55558
“Alkaline phosphatase”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Alkaline_phosphatase
“Sodium nitrite”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Sodium_nitrite
“다이아조화”, 두산백과
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1086050&ref=y&cid=40942&categoryId=32271
Campbell, P. A. (2014). Alkaline Phosphatase Staining . Bio-protocol 4(5): e1060. DOI: 10.21769/BioProtoc.1060.
Štefková, K., Procházková, J., & Pacherník, J. (2015). Alkaline Phosphatase in Stem Cells. Stem Cells International, 2015, 1–11. doi:10.1155/2015/628368
Mercè Martí1, Lola Mulero1, Cristina Pardo1, Cristina Morera1, Meritxell Carrió1, Leopoldo Laricchia-Robbio1, Concepcion Rodriguez Esteban1,2 & Juan Carlos Izpisua Belmonte1,2. (2013). Characterization of pluripotent stem cells. Nature America, Inc. doi:10.1038/nprot.2012.154
“Germ layer”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Germ_layer