생물환경화학실험(배양 및 살균효율 테스트)

소개글

서로 다른 지점에서 채취한 물 속의 대장균을 배양하고, 이 대장균에 대하여 천연물질을 추출, 접종하여 살균효율을 테스트하는 실험이다. 실험은 총 4파트로 나뉘어져 있으며, 그람염색법, 정성시험, 감태나무 추출물 추출, 살균효율테스트이다.
본 실험을 통해 임의의 시료에 들어있는 대장균의 유형을 구분짓고, 식물체 내의 살균물질을 추출하여 살균효율을 측정하는 법을 배운다.

목차

1. 그람염색법
2. 대장균 정성시험
3. 감태나무 추출물 추출
4. E.cerous에 대한 Citral의 항균활성실험

본문내용

실험 제목: 그람염색법 (Gram staining)

실험 일자: 2014년 9월 16일 화요일 ~ 2014년 9월 18일 금요일

실험 목표: 배지에 세균을 접종하는 법과 구획된 구역에 배양된 두 종류의 세균을 염색하여 그람음성균과 그람양성균의 대표적인 구분법인 세포 외벽의 구조 차이점과 그람 염색법의 실험법에 대해 안다.

서론: 그람 음성균은 세포 외벽구조의 10~20%를 차지하는 얇은 펩티도글리칸 층을 가지며, 그 외부에 다당지질(Lipopolysaccharide)과 지질단백질(Lipoprotein)로 된 외막을 가진다. 그람 양성균은 세포 외벽 구조의 80~90%를 차지하는 두꺼운 펩티도글리칸 층(peptidoglycan layer)을 가진다. 이러한 세포 외벽 구조의 차이점을 이용하여, 그람 음성균과 그람 양성균의 차이를 시각적으로 확인하기 위한 실험이다.

실험 원리: 생물학자 Gram에 의해 1884년에 개발된 그람 염색법은 그람 음성균과 그람 양성균의 세포벽 구조의 차이를 이용한 실험이다. 슬라이드 글라스에 세균을 도말 후 펩티도글리칸 성분과 결합하는 염기성 용액인 크리스탈 바이올렛 시약을 고정된 세균에 뿌려 염색 한 후, 크리스탈 바이올렛의 발색을 위해 요오드 용액을 투약하여 착색한다. 그러면 크리스탈 바이올렛 용액과 요오드가 반응하여 불용성 물질을 생성하여 자색을 띠게 된다. 다음 알코올로 착색된 크리스탈 바이올렛을 씻어내어 착색된 세균을 탈색한 뒤, 탈색된 그람 음성 세균의 염색을 위해 염기성 용액인 사프라닌으로 염색한다. 이때 사프라닌은 크리스탈 바이올렛보다 얕은 색인 분홍빛으로 염색되므로 보라색으로 염색된 균은 상관하지 않는다.

실험 도구 및 재료: 마이크로 피펫, 피펫팁, 씻기병, 사프라닌, 크리스탈 바이올렛, 요오드 용액, 95% 에탄올, 증류수, 영양배지, 페트리 디쉬, 접종용 면봉, E.coil 배양액, S.eqidermids 배양액, Loop & Needle(SPL), 스포이드, 슬라이드 글라스, 커버 글라스, 현미경, 알코올 램프

참고 자료

없음