Transfection

목차

1. Introduction
1) 실험원리
1)-1 Transfection
1)-2 Plasmid
1)-3 Mechanism of cationic lipid-mediated transfection
1)-4 재조합 DNA
2) 실험의 역사

2. Material
1) 시약
2) 도구

3. Method
1) 실험방법
1)-1 Sub culture for Transfection
1)-2 Transfection

4. Result

5. Discussion

6. Reference

본문내용

형질주입은 유전자 DNA, 플라스미드 DNA, 바이러스 DNA, RNA 등을 바이러스입자 등의 형태를 취하지 않는 알몸에 가까운 상태에서 세포배양 또는 세포현탁액에 가하는 세포에 유전자도입(gene transfer) 또는 감염을 실시하는 것을 말한다. 이것을 실시하는 방법은 생물종에 따라 다르다. 예를 들면, 대장균에서는 스페로플라스트(spheroplast)로 만들어 가하거나 칼슘처리를 한 세포현탁액에 DNA를 직접 가한다. 배양동물세포에서는 A. J. van der Eb(1973)가 최초로 이용한 인산칼슘-DNA공침전법(calcium phosphate-DNA copre-cipitation method)이 일반적이다. DEAE-덱스트란법(DEAE-dextran method)도 사용된다. 전기천공법(electroporation)을 형질주입에 포함시키기도 한다. 인산칼슘-DNA 공침전법에서는 염화칼슘액을 인산나트륨액에 부어서 수산화인회석(hy-droxyapatite)의 침전이 생길 때에 DNA를 공존시켜 공동침전물을 만들고, 그것을 동물세포의 배양에 직접 더하여 형질주입을 성립시킨다. 이렇게 하면 세포질에 넣어진 공동침전물의 일부가 핵으로 이동한다. 핵으로 이동된 DNA 형태의 유전자는 그 세포에서의 전사제어 상태가 허용되면 높은 효율로 전사되어 유전자 발현을 초래하지만, 그것은 2일 정도의 짧은 기간 밖에 지속되지 않는다. 이것을 일과적 발현(transient expression)이라고 한다. 그 후에 받아들여진 DNA의 대부분은 붕괴되지만 일부는 세포의 염색체 속에 포함된다. 포함된 유전자의 일부는 낮은 효율이기는 하지만 발현을 계속한다. 이것을 영속적 발현(permanent expression)이라고 한다. 약제내성 유전자가 형질주입에 의해서 도입되어 영속적으로 발현하게 되었을 경우에는, 그 세포의 클론(clone)을 그 약제내성에 의해서 선택적으로 증식시킬 수 있다 이것을 적극적 선택(positive selection)이라고 한다.

참고 자료

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