Genomic DNA 추출과 중합효소연쇄반응을 통한 DNA 프로파일링

목차

I. 도입
1. PCR의 기본 원리
2. PCR의 단계
3. xg를 rpm으로의 단위환산
4. DNA 추출 실험에서 에탄올의 역할
5. DNA 추출 실험에서 계면활성제의 역할
6. 실리카막에 DNA가 붙는 원리

II. 과정

III.결과 및 논의

본문내용

1. PCR의 기본 원리
PCR의 기본 원리는 연쇄반응으로서 1개의 DNA 분자로 2개의 복제본을 생성하고, 그 후로 4개, 8개 등을 생성하는 데 사용한다. 연속적으로 일어나는 배가 반응은 중합효소에 의해 수행되는데, 중합효소는 개별적인 building block을 연결해서 긴 분자 나선을 형성할 수 있는 효소이다. 이러한 과정을 수행하려면 DNA building blocks인 아데닌(A), 구아닌(G), 사이토신(C), 티민 (T)의 공급이 필요하다. 중합효소는 프라이머로 알려진 DNA의 작은 부분을 필요로 하는데, 중합효소는 여기에 새로운 나선을 만들기 위한 것으로 사용하기 위해서 긴 DNA와 building blocks를 부착시킨다. 3가지 성분이 공급되면 효소가 정확한 복제본을 만들 수 있다. 간단히 말하면, PCR은 핵산의 특정한 나선의 복제본을 다량으로 얻기 위해서 사용되는 방법이다. 또한 DNA의 특정 부분을 선택적으로 증폭시키는 수단으로 사용된다.

2. PCR의 단계
PCR은 변성(denaturation), 결합(annealing), 확 장(extension)의 3가지 주요 단계가 있다. PCR 을 이용해 DNA 단편을 증폭하기 위해서 시료를 95°C 까지 가열해서 DNA를 변성시키거나 2개의 단일 나선 DNA로 분리하는 변성단계를 거친다. 95°C 까지 가열하기 때문에 PCR증폭기의 뚜껑은 104°C까지 가열되어 뚜껑에 수증기가 맺히는 것을 방지한다. 그 다음, Taq 중합효소가 원래의 나선을 주형으로 사용해서 2개의 새로운 DNA나선을 합성한다. 이런 방법으로 원래의 DNA가 복제되고, 각각의 분자는 새로운 DNA 나선과 오래된 DNA 나선을 가지게 된다. 이 각각의 나선은 새로운 복제본을 만들 때 사용된다. 결합단계는 50~60°C 정도의 낮은 온도에서 이루어지는데, 이렇게 하면 프라이머가 각각의 상보적인 주형 나선에 교잡할 수 있게 된다. 주형에 부착된 프라이머의 새롭게 만들어진 DNA 나선을 이용해서 원래의 주형 나선과 똑같은 복제본을 만들 수 있다.

참고 자료

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