Preparation of competent cell & Transformation

소개글

실험제목 : Preparation of competent cell & Transformation
실험목적 : PCR로 증폭시킨 cell과 다른 항생제(Amp)내성이 없는 cell을 선택해서 저번 실험에서 만든 plasmid가 들어갈 수 있는 준비가 된 competent cell을 만든 후 plasmid를 넣어주고 배양 후, 배지에 도말까지 하기 위함이다.

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험재료
4. 실험원리
5. 실험방법
6. 실험결과
7. 고찰

본문내용

실험원리 :
1) competent cell : 정상적인 박테리아에 물리적·화학적 처리를 통해 외부DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 세포를 말한다.
- 제조원리
E.coli가 DNA를 흡수할 수 있는 상태가 되어야 한다. 이를 위해서는 DNA가 세포막 주변에 존재해야 하는데 DNA의 인산기(-)와 세포막의 디아실글리세롤(-)이 서로 척력이 발생한다. 따라서 이를 중화시키기위해 Ca²⁺, Rb²⁺를 사용한다. (CaCl₂, RbCl₂)
세포막 고유의 charge가 변해 막구조가 느슨해지고 불안정해진다. 이후 낮은 온도(0-4℃)에서 배양하면 세포막이 낮은 온도에서 응고되어 양이온과 세포막 표면의 결합이 안정될 수 있다. 이렇게 표면에 양이온이 둘러싸도록 염용액을 처리한 세포에 DNA를 첨가하면 DNA(-)가 세포외부에 부착하게 된다.
세포 안에 DNA를 넣는 방법으로는 2가지가 있다.
① heat shock : 세포-DNA 혼합용액을 42℃에서 가열하면 세포 유동성이 증가 → 부착 외부DNA가 세포질 안으로 들어간다.

참고 자료

없음