FACS

목차

Ι. Introduction
Ⅲ. Methods
Ⅳ. Result
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. References

본문내용

Ι. Introduction
본 실습의 목적은 FACS를 이용하여 말초혈액 내의 CD3+, CD4+, CD8+, CD19+의 marker를 이용하여 leukocyte 중 lymphocytes의 분포를 확인하는 것이다. 이때 T cell들은 CD3+이며 이런 T cell에서도 CD4+T cell과 CD8+ T cell로 나뉜다. 그리고 B cell은 표현형이 CD19+이다. 이런 사실을 이용하여 혈액 속의 각 lymphocyte들의 분포를 확인한다.

실험에 사용된 유세포 분석법(Flow cytometry)에 대해 살펴보면,
Flow cytometry는 light scatter를 이용하여 각각의 cell type을 확인하는 방법인데 이때 forward scatter로 size를 side scatter로 granularity나 complexity를 확인할 수 있다. 여기서 sorting을 하는 원리는 세포들이 flow cytometer를 통과하면서 기계는 계속적으로 세포에 대한 정보를 받고 세포 표면에서 일어난 scatter에 의한 정보가 기계의 감광판을 때리고 기계는 해당 cell의 FSC/SSC값이 우리의 관심의 대상인 lymphocyte의 FSC/SSC 값에 해당되는지를 판단한 다음 우리가 원하는 세포를 한곳으로 모으게 된다. 그리고 fluorescence를 이용하는데 이때 여러개의 marker를 동시에 사용하여 혈액 속의 구성 비율을 동시에 측정할 수 있다. Antibody에 conjugation된 dye를 쓸 경우, antibody의 specificity 덕택에 원하는 cell marker에만 형광물질을 tagging할 수 있다. cell에 여러 가지 색깔의 Immunoflourescent dye를 처리하면 다양한 cell surface marker를 한 번에 확인할 수 있다. 이를 Multiple flourescent staining이라고 한다. 이때 색깔간의 overlap되는 부분은 compensation해준다.

참고 자료

Abul K. Abbas, Cellular and Molecular Immunology 7/ed., 2011, Elsevier.