미생물 생리(예비)
- 최초 등록일
- 2012.03.07
- 최종 저작일
- 2011.09
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소개글
미생물 생리
목차
1. 실험 목적
2. 실험 원리
3. 실험 재료 및 방법
4. 참고문헌
본문내용
<방법>
(1) 멸균된 시험관 3개와 25㎖ Erlenmeyer flask 3개에 "Lac"(lactose-positive)와 넣는 기질의 이름(glucose, lactose, 또는 물)을 적는다. 그리고 다른 test 시험관과 flask에 “Lac"(lactose-negative)를 적는다.
(2) 멸균된 5㎖ pipette를 이용해 Lac+와 Lac-균주를 키운 inorganic synthetic broth culture 5㎖를 각각의 표시해 둔 시험관에 옮긴다.
(3) 멸균된 1㎖ pipette를 이용하여 glucose와 lactose solution, 멸균 증류수 0.5㎖씩을 적당하게 labelled tube에 가한다.
(4) 모든 culture의 O.D.를 600nm에서 측정한다.
(5) 각 culture를 각각의 Labelled flask로 옮긴다.(만약 side-arm flask를 이용할 수 있으면 시약을 넣는 것과 O.D.의 측정을 동시에 할 수 있다.)
(6) 모든 flask를 37℃, 100 stroke/min로 shaking water-bath에서 2시간동안 배양한 다음 모든 culture를 각각의 labelled 시험관에 다시 넣는다.
(7) 각 culture에 대한 O.D.를 600nm에서 측정한다.
(8) 각 culture에 toluene 5방울을 넣고 세게 흔든 후 (toluene은 cell을 깨고 온전한 enzyme를 유리한다.) ONPG(200㎎/㎖) solution 5방울을 가한다.
(9) 모든 culture를 37℃엥서 40분 동안 incubation하고 노란색을 나타내는지 관찰한다.
참고 자료
<책>
김영희,「분자생물학 실험서」, 월드사이언스, 2008
오계현,「Brock의 미생물학 12판」, 바이오사이언스(주), 2009
<인터넷>
네이버, 검색어(Lac operon) : http://blog.naver.com/jcy1006/10097917121