세포생존도 검사법

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Trypan blue dye exclusion법, Eosin Yexclusion 법, Hemocytometer를 이용한 세포수 산정방법
에 실험 방법과 계산법이 있습니다.

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본문내용

세포생존도 (Cell Viability ) 검사법

○ Trypan blue dye exclusion법
1 . 검 사 원 리- 살아 있는 세포는 색소가 침투되지 않아 염색이 안되고 죽은 세포는 색소가 침투되어 푸른색으로 염색된다 . 살아있는 세포의 %를 산정한다 .

2 . 주 의 사 항1) 염색이 된 후에 3분내에 산정을 완료하여야 한다 . 3분 이후에는 살아있는 세포도 염색되기 시작한다 .2) Trypan blue 색소가 단백질과 친화력이 매우 크므로 세포를 부유시킨 희석액에 혈청성분이 있으면 생존도가 실제보다 높게 나올 수 있다 . 따라서 희석액에 혈청성분이 없어야 정확한 결과를 얻을 수 있다 .
3 . 시 약1) Tryphan Blue 1% Stock Solu tion① Tryphan Blue 1g을 증류수 100ml에 녹인다 .② Whatma n # 1 여과지 또는 5∼10μ Filter를 이용하여 여과하여 4℃에 보관한다 .2) Tryphan Blue Working solution① 사용하는 당일 Stock Solutio n 3ml에 PBS (또는 HBSS) 7ml을 혼합한다 .② 보관 불가3 ) 생리 식염수

4 . 방 법1) 사용 당일 Tryphan blue working Solution을 제조한다 .2) Trypan blue Workin g Solu ton과 동량의 세포부유액 (2∼5×106 / ml)을 혼합한다 .3 ) 염색된 세포부유액을 Neubauer chamber에 채우고 살아있는 세포와 죽은 세포를 3분이내에 감별 계산하여 세포 생존도 %를 구한다 .(총 200개의 세포를 세는 것이 정확하다 .)
5 . 결 과 해 석1) Cell Viability의 허용치는 80%(ASHI Standards)이며 HLA Typing에서는 90% 이상이 바람직하다 .
2) Cell Viability가 낮은 경우에는 새 검체로 재분리하거나 죽은 세포를 제거하는 Cleanup technique을 사용한다 .

참고 자료

없음