세포염색 레포트

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자연과학

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<조직고정>
(1) 고 정
고정의 첫째 목적은 살아 있는 상태와 가장 가깝게 원형질을 고정시키는 데에 있다. 고정액은 조직 속에 들어있는 효소의 소화 작용을 막아 주며 또한 방부제로서 자가변성에 따른 세균의 번식을 방지한다. 대부분의 고정액은 원형질을 화학적으로 응고시켜 용해되지 못하게 할 뿐만 아니라 조직을 굳게 하여 잘 절단 될 수 있게 한다. 또 어떤 고정액들은 원형질의 염색정도를 증가시켜 준다.
흔히 사용되는 고정제로는 formalin, alcohol, mercuric chloride, potassium bichromate 등과 picric acid, acetic acid, osmic acid 들이 있다. 한 가지 고정액에 필요한 모든 성분을 포함시키기는 불가능하므로 Bouin, Zenker 액과 같은 것은 몇 가지 시약을 혼합해서 사용한다. 고정액의 선택은 조직의 종류와 이용할 염색방법 등에 따라 결정된다.
- 세포의 미세구조가 보존되도록 고정액을 가능한한 빨리 침투시켜야 하기 때문에 매우 작은 조직덩어리를 떼어서 빠른 시간내에 고정을 마쳐야 한다. 조직의 크기는 대개 1mm3 혹은 더 작은 크기로 만든다. 그리고 조직의 사후변화가 뚜렷이 나타나므로 신선한 조직을 사용해야 한다. 조직을 고정할 때는 그 구조를 최대한 보존하기 위해 세심한 주의가 필요하다. 우선 burffered glutaraldehyde 용액을 사용하고 이어서 burffered osmium teroxide 용액을 사용하는 이중고정법이 흔히 이용되고 있다. Glutaraldehyde는 세포의 단백질 성분을 고정시키고, osmium tetroxide는 지질 특히 인지질을 보존하여 준다.
<파라핀 블록 만들기>
(1) 포 매
포매의 목적은 조직을 얇은 절단표본으로 절단하기 위해 조직을 굳게 하는 것이다. 포매에 앞서 고정된 조직은 흐르는 수돗물로 수세하여 조직속에 들어 있는 과잉의 고정제를 제거한 다음 농도가 점차 높은 탈수제(예, ethyl alchol)로 조직내 수분을 제거한다. 그리고 이어서 탈수제를 제거하고 탈수제와 포매제가 혼합된 액체로 바꾸는데, 이 과정을 거치면 조직이 투명해지므로 이를 투명화 과정이라 한다. 투명제의 종류는 xylol, chloroform, benzen, cedarwood oil 등이 있다. 투명화 과정후에 조직은 주로 파라핀 paraffin 이나 셀로이딘 celloidin 같은 포매제를 침투시킨 후 굳도록 한다.
특수한 연구를 위하여 조직을 고정, 탈수 및 투명화 과정의 전처리를 하지 않고 바로 파라핀에 포매할 수도 있다. 이 방법은 동결건조 freeze drying법으로서 신선한 조직을 급속히 냉각시켜 동결된 채로 진공상태에서

참고 자료

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