형질전환 된 대장균 배양

소개글

형질전환 된 대장균 배양

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험이론
(1)LacZ를 이용한 color selection ( + 균주 선별방법)
(2) 단백질 Induction

(3) 세포 파쇄 방법

(4)Plasmid prep 방법

4. 참고문헌

본문내용

(1)LacZ를 이용한 color selection ( + 균주 선별방법)
LacZ를 이해하기 위해서는 Lac operon이란 것을 알아야 하는데, 이는 박테리아에서 시행되는 유전자 발현 조절 기구로서 Lac operon은 E. coli가 lactose를 galactose와 glucose로 분해하는데 필요한 효소인 beta-galactosidase를 만드는 유전자이다.  

Lactose가 없을 때에는 불필요한 유전자인 beta-galactosidase는 생성되지 않는데 그 이유는 유전자의 앞쪽에 있는 inhibitor region에서 생성된 inhibitor가 promotor 영역의 operator 부분에 결합하여 RNA polymerase 가 활동하는 것을 방해하여 beta-galactosidase가 생성되지 않도록 하기 때문이다.

그러나 lactose가 배지에 있으면 이 물질이 inhibitor와 결합하여 operator에서 떼어내게 된다. 따라서 RNA polymerase가 잘 작용하여 mRNA를 만들고, beta-galatosidase를 만들면서 lactose를 분해한다. 그 후 lactose가 다 분해되면 inhibitor가 다시 붙어 유전자는 turn off 상태로 돌아간다.

이런 유전자 조절 기구를 실험에 이용하고자 하는 것이 바로 LacZ이다. 이 부분을 plasmid에 삽입해 놓게 되는데, 이때 LacZ operon이 동작하고 있는가 확인하기 위해서는 IPTG와 X-Gal이라는 두 가지 물질을 사용하게 된다.
• IPTG는 LacZ gene inducer역할을 한다. Lactose 대신 inhibitor와 결합하지만 분해되지 않는다.
• X-Gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 lactose 대신 beta-galactosidase에 의하여 대사되는 물질이다. 일종의 변형된 galactose sugar로서 원래 무색이지만 beta-galactosidase에 의하여 대사되면 푸른색을 낸다.
따라서 LacZ의 MCS에 DNA가 재조합되지 않은 박테리아의 colony는 LacZ가 제기능을 발휘하여 X-Gal을 대사시키므로 푸른 색이 되고, DNA가 재조합된 박테리아의 conony는 LacZ가 망가져서 기능하지 않아 X-Gal이 그대로 남아 있어서 흰색 colony가 된다. 이렇게 색깔의 차이로 DNA가 plasmid 에 들어가서 세포 내에서 증폭되어 기능하는지 알 수 있다.

참고 자료

http://en.wikipedia.org/wiki/Lac_operon
http://blog.naver.com/dream704?Redirect=Log&logNo=20006182899
http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&docid=83537&qb=7IS47Y+s7YyM7IeE&enc=utf8&pid=fVl9gsoi5UNssaKk4Jwsss--226211&sid=Ssgwe2wRyEoAAFgMFN0
http://blog.naver.com/hweonpyo?Redirect=Log&logNo=130019212941
http://blog.naver.com/dextermh?Redirect=Log&logNo=10016922906
http://blog.naver.com/genetic2002?Redirect=Log&logNo=30001808165