confocal microscopy

소개글

confocal microscopy에 관한 실험보고서

목차

Abstract

Introduction
◉animal cell culture
◉ Transfection
◉confocal microscope
◉Confocal microscopy의 응용
◉ FRET(Fluorescence Resonanve Energy Transfer)
Materials
Methods
Data & Result
Discussion
References

본문내용

Abstract
이번 실험은 animal cell(293T HEK cell)을 transfection 시켜서
293T-EGFP transfection cell을 Confocal Microscopy를 이용해 관찰하고, confocal microscopy의 원리를 알아보는 실험이었다. 실험은 293T HEK cell4x105개를 counting 해서 T-flask에 분주하고 incubation 한 후 ① incubation 한 cell+fransfection mix(EGFP가 들어있는 것), ②incubation 한 cell+control mix(EGFP가 들어있지 않은 것)을 각각 만들어 36~48시간동안 배양하고 confocal microscope로 관찰하는 방식으로 진행되었다.
관찰결과 ①의 flask에서는 초록색 형광이 나타나는 것을 확인할 수 있었고 control 로 만든 ②에서는 형광이 나타나지 않은 cell의 형태만 나타나는 것을 확인 할 수 있었다.

Introduction
◉animal cell culture
293T cell은 human embryonic kidney 293 cell로 HEK 293, 293 cell, HEK cell 등으로 불린다. 이 cell line은 배양이 쉽고 transfection이 잘 되어 cell biology 연구에서 오랫동안 널리 사용되어왔다. 또한 유전자 치료법을 위한 바이러스와 단백질을 생산하는데에도 응용된다. 293T cell은 adenovirus DNA를 transformation하여 human embryonic kidney cell의 chromosome 19에 viral genome을 incoporation하여 제작한 cell line이다.
◉ Transfection

<Figure1. Transfection>
Transfection이란 외래의 DNA를 eukarayotic cell에 주입하는 것을 의미하는 것으로, 간단히 말해 외부 DNA를 cell 에 넣어 다른 특징을 만드는 것을 말한다. 일반적으로 cell에 일시적으로 구멍을 만들어 외래의 DNA가 도입될 수 있게 한다. 주입되는 DNA는 주로 supercoiled plasma DNA이고 siRNA가 도입되기도 한다.

참고 자료

실험 6. Animal cell culture and confocal microscope 매뉴얼.
http://www.iscid.org/encyclopedia/Transfection
Morelle, G. (1988) Aplasmide extraction procedure on miniprepscale. Focus 11, 7.
유전자 크로닝 입문 제 3 판. 대표저자 강종백 외 2명 저, 월드 사이언스 pp47~49