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소개글
Influenza virus에 관련된 실험 레포트 입니다.
목차
1. Introduction2. Result
(1) Mammalian Cell Culture
(2) Propagation of Influenza Virus
(3) Plaque Assay
(4) RNA Isolation
5) Reverse Transcription for cDNA Synthesis
(6) PCR
3. Discussion
4. Application
5. Reference
본문내용
1. IntroductionInfluenza virus는 흔히 이야기하는 "the flu" (감기)를 유발하는 가장 흔한 virus중의 하나이다. 인간에게 가장 큰 영향을 미치는 type은 Influenza A로 abrupt fever, sore throat, dry cough, muscle soreness, headaches등을 유발한다.
이번 실험에서는 1986년 Singapore에서 유행하여 isolation된 H1N1 Influenza virus를 이용하여, cell에 Infection시킨 후 Plaque assay를 통해 Growth curve를 보고, RNA Isolation 후 RT-PCR, PCR을 거쳐, 원하는 부분의 sequence가 실험에 이용되었는지를 확인하는 것을 목표로 하였다.
2. Result
(1) Mammalian Cell Culture
*Methods
① Water bath에 media, PBS, Trypsin-EDTA를 준비한다.
② Plate의 medium을 제거한다.
③ Plate에 PBS를 넣고 한 두번 흔들어준 후 제거한다. (Washing)
④ Trypsin-EDTA 0.5ml를 넣어주고 제거한다. (바닥에 붙은 세포를 떼어줌)
⑤ 37도 incubator에서 5분간 배양한다.
⑥ plate에 20ml media를 첨가하고 잘 섞어준 후 cell counting을 한다.
⑦ 새로운 6 well plate를 준비한 후, media를 2ml씩 넣고, cell을 1ml 넣은 후 37도 incubator에서 배양한다.
* Result
Cell counting 결과 세포는 91×104으로 나왔고, 총 volume이 20ml였으므로, 최종적인 cell의 숫자는 1.8×107이라고 생각할 수 있었다.
Cell culture는 cell이 80~90% 정도의 confluent한 상태가 되었을 때 실시하며 세포의 종류에 따라 세부적인 순서는 변화할 수 있다. 이번 실험에서는 Plaque assay를 관찰하기 위해 Vero Cell을 이용하였다. vero는 African green monkey의 kidney epithelial cell에서 분리한 것이다. (실험 (3))
참고 자료
Madigan, Michael T., 《Brock biology of microorganisms. 11st ed》, 월드사이언스, 2006.민경희 외역, 《대학 미생물학, 8th ed》, 탐구당, 2000
J Gen Virol., <Evolution of the HA1 domain of human influenza A (H1N1) virus: loof glycosylation sites and occurrence of herald and conserved strains.>, National Public Health Institute, Helsinki, Finland. 1995. 205-10. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi. <Antigenic and genetic study of influenza virus (H1N1) circulated in China in 2004-2005>, 2006. 27-9.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nuccore&id
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nuccore&id=94
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/bl2seq/wblast2.cgi?0
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=nuccore&cmd=&term=h1n1%201986%20influenza%20A481525=133754207
