beta-galactosidase enzyme induction 예비 레폿입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 이론
ⅰ) PAGE(Poly acrylamide Gel Electrophoresis)
ⅱ) -galactosidase enzyme induction
ⅲ) His-tag

3. 실험 기구 및 장치
ⅰ) 시료
ⅱ) 기기

4. 실험방법
ⅰ) -glycosidase isolation.
ⅱ) -galactosidase assay.

본문내용

bacteria colony 색깔변화를 관찰함으로써 -galctosidase 효소의 발현이 유도되었음을 알아본다.

2. 이론
ⅰ) PAGE(Poly acrylamide Gel Electrophoresis)
acrylamide를 crosslinker로 중합하여 polyacrylamide를 만드는데, acrylamide와 crosslinker의 농도 비율에 의해 gel 내 미세 통로의 크기를 조절할 수 있어 다양한 크기의 생체 분자들을 분리 할 수 있을 뿐 아니라, 높은 정밀도와 고 분해능을 가지고 있어 단백질이나 핵산의 분리에 사용한다. 분리 범위는 acrylamide와 crosslinker의 중합 정도로 결정된다.
PAGE에는 하나의 gel만을 사용하는 연속적 시스템과 buffer 조성이 다른 2개의 gel을 사용하는 불연속적인 방법이 있다. 연속적 시스템은 pH 3~11사이의 buffer를 한 가지 사용하여 gel과 음전극 액 내 전해질 조성 및 농도를 동일하게 만들어 전기영동 하는 방법이고, 불연속적 시스템은 stacking gel을 사용하는 방법이다.
또는 ionic detergent의 사용 유무에 따라 dissociating, non-dissociating법으로 구분하기도 한다. dissociating법은 SDS(sodium dodecyl sulfate)와 같은 ionic detergent나 수소결합을 끊어주는 urea등을 단백질 시료에 첨가한 후 열을 가해 denaturation 시킨 후 단백질 복합체를 개별 단백질로 해리하여 분석하는 방법이다.
disulfide bond를 해리시켜주는 reducing agent(b-mecaptoethanol or DTT)의 사용유무에 따라 reducing non-reducing법으로 구분하기도 한다. non-reducing법은 단백질 변성을 주지 않고 단백질 복합체를 단백질의 고유한 전하에 의해서만 분리하는 방법이다.

참고 자료

없음