종양실습-rt pcr을 위한 전 과정

목차

1. Cell thawing
2. Cell split
3. RNA extraction
4. RT-PCR & Primer choosing
5. Primer attaching & Electrophoresis

본문내용

1. Material
Waterbath, Pipette, 100π petri dish, incubator
Frozen SNU449 cell in vial, RPMI1640, PBS

2. Method
Vial을 냉동실에서 꺼낸다.
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Vial을 37˚C waterbath에 넣어 흔들어가며 녹인다.
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녹은 SNU449 cell을 15ml falcon tube로 옮긴다.
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RPMI1640 media 3ml을 넣고 pipetting 통해 suspension 시킨다.
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Centrifuge 13000rpm, 5min
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상층액을 버리고 1xPBS 3ml로 washing한다.
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Centrifuge 13000rpm, 5min
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상층액을 버리고 medium 1ml suspension 시킨다.
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medium 7ml 을 넣어놓은 petri dish (미리 준비)에 cell 현탁액을 골고루 분배한다.
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Petri dish를 동서남북으로 흔들어 세포가 골고루 흩어지게 한다.
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Incubator (37˚C, 5% CO₂) 에서 배양한다.

3. Discussion
? snu-449 Cell
Human liver cell derived from male, 52years old, Mongoloid. Hepatitis B virus integrated. Has epithelial morphology and grow in monolayer. Population doubling time: 36hr. Culture in RPMI1640 medium.
? Chang Cell
Human HeLa cell in liver tissue. Culture in DMEM medium.
? Cryopreservation
At -80 to -196°C, cells remain dormant without death and can again be retrieved in functional state.

참고 자료

‘Animal cell culture concept application’ Sheelendra M. Bhatt (asicence)
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochemmolecular/genecloning25.php