DNA sequencing방법에 관한 피피티

소개글

분자생물학 과목 에이플러스 받았습니다, 2년동안 장학금 받았으며 다음 피피티는 DNA sequencing방법에 관한 피피티입니다.
에니메이션, 배경은 꾸미지 않았으므로 내용을 가지고 피피티를 만드시면 됩니다. 과정에 관한 자세한 방법을 상세히 작성하였습니다.

목차

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본문내용

Genomic DNA의 분리 및 정제사용시약
차가운 증류수와 1.8% NaCl
Phosphate-EDTH butter(PEB)8.47g, NaCl 3.69g, Na₂HPO₄3.35g, EDTA.2Na, pH 7.2
5% Dextran solution; 5g Dextran(Sigma, D-5251, PEB 100mL에 녹인것
10% SDS(sodium dodecylsulfate)
Proteinase K(20mg/mL0
WBC Lysis 완충액(10mM tris, pH 7.6, 50mM NaCl, 10mM EDTA)
Ethanol, 70% Ethanol

WBC의 분리.1
10mL 전혈에 3mL의 5% dextran을 가하고 충분히 혼합한 후 실온에 20분간 세워둔다.
RBC는 끼리끼리 뭉쳐 빨리 침강하고 WBC는 아직 침강하지 못하고 혈장층에 남아있다.
(Dextran은 긴 탄수화물 중합체로서 RBC들을 서로 엉기게 하여 무겁게 하고 이 때문에 원래의 침강속도보다 훨씬 빠르게 침전시킨다. 반면에 용매의 비중을 높여 주기 때문에 WBC의 침강속도는 느려진다.)

WBC의 분리.2
혈장 층을 조심스럽게 취해 새 튜브에 옮기고 1000x g, 5분간 원심분리한다.
침전물에 6mL의 차가운 증류수를 가하고 20초간 진탕하여 풀고 바로 동량의 차가운 1.8%NaCl을 가하여 혼합한다. 차가운 증류수를 가하고 너무 오래(30초 이상) 방치하면 WBC도 파괴된다. 만약 시약들이 차갑지 않으면 RBC lysis가 완벽히 일어나지 않으므로 항상 얼음에 놓고 사용하도록 한다.

WBC의 분리.3
1000x g, 5분간 원심분리 한다.
상층액을 버리고 침전물을 관찰하여 노르스름한 WBC만 보일때까지 이전의 차가운 증류수를 가하고 1.8% Nacl을 혼합하는 과정을 반복한다
(보통 1~2회 정도면 깨끗한 침전물을 얻을 수 있다.)

참고 자료

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