[분자생물학] Northern Hybridization

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겔 전기영동을 통해 크기별로 분리된 DNA중 원하는 것을 찾아내는 Southern hybridization 이후 원하는 RNA를 찾아내기 위해 RNA-DNA 교잡을 이용한 Northern hybridization 방법이 개발되었다. RNA의 정성, 정량을 행하기 위하여 이용되며, 이 방법에 의해 RNA의 크기나 농도에 대한 정보가 얻어져 mRNA의 발현이 어느 정도 행하여져 있는가를 알 수 있다.

본문내용

기본적으로는 원리는 Southern hybridization과 동일하다. DNA와 RNA의 물리적 성질상 중요한 차이를 고려해 Northern hybridization의 변형된 방법을 알아보겠다. RNA는 단일가닥이므로 intramolecular base pairing이 자유자재로 생길수 있다. 이렇게 형성된 2차구조는 겔상에서 길이에 따라 분리되지 못하도록 영향을 주기 때문에 적당한 denaturing agent (glyoxal DMSO formaldehyde)를 첨가해주어 RNA가 길이에 따라 분리되도록 하여야 한다. 겔상에서 분리된 RNA는 immobilizing matrix (nitrocellulose filter, nylon filter)로 옮겨진 후 probe를 이용한 hybridization으로 원하는 RNA를 찾아 낼 수 있다. 이와 같은 방법으로 특정 RNA가 세포내에서 또는 조직내에서 전사되는지의 여부와 전사되는 상대적인 양과 안정도를 정량화 할 수 있다.

참고 자료

없음