RNA합성 실헙 방법

소개글

RNA합성 실험 방법 및 추가 설명

목차

RNA 합성(in vitro Transcription), RNA 정제 (translation)

1.실험 목적
(1) S1분석
(2) primer extension
2.RNA와 DAN차이점
3.RNA종류
4.실험 재료
5.실험 방법
6.실험예상 결과
7.실험 시 주의 사항

본문내용

※실험 목적

RNA 분리의 주요 목적은 유전자 발현기작을 분석하는데 있다. 유전자 조절의 원리를 밝히기 위해서는 RNA의 구조, 양, 크기 등을 상세히 분석하는 것이 필요한데, 이런 분석은 S1분석, primer extension, northern blot 등의 실험을 통해 알 수 있다. S1분석, primer extension hybridization의 실험은 특정 RNA의 양과 말단을 모두 결정할 수 있으며 northern blot hybridization은 RNA의 크기와 양을 알아볼 수 있다.

1) S1분석
이미 알고 있는 유전자의 전사시작점을 알아보기 위해 사용되는 방법으로 분리된 RNA와 이 RNA가 유래된 DNA를 섞어서 혼성체를 만든 후 S1 핵산분해 효소의 작용에 의해 단일 가닥인 DNA부분은 분해되고 RNA와 결합된 DNA부분만이 남게 된다. 남은 DNA의 길이는 변성 겔 전기이동에 의해 알 수 있으므로 결국 전사시작점을 알 수 있게 된다.

2) primer extension
주로 RNA 5` 말단을 알아보기 위해 쓰이나 변형된 염기를 찾기 위한 방법으로도 이용된다. 5‘ 말단을 알고자 하는 RNA의 3’쪽(5‘말단에서 대략 40 nucleotide 떨어진 위치가 분석하는 데 쉽다.)에 primer를 만든다. 그리고 이 primer와 RNA를 섞어서 혼성체를 형성한 후, 역전사 효소를 이용하여 DNA 중합반응을 일으킨다. 그러면 중합반응 RNA의 4’말단에서 정지하고 이 primer로부터 extension된 DNA를 변성 겔 전기이동으로 분석하면 RNA의 5‘말단을 알 수 있다.

참고 자료

생화학 길라잡이|박인국 역|라이프사이언스|