[생명과학]IHC (Immunohistochemistry) 실험

소개글

동종, 이종 이식된 조직이나, spleen을 IHC 염색하여 관찰한다.
실헙결과를 사진으로 찍어 첨부하였습니다..

목차

준비물 실험방법 결과 고찰 염색법/Antigen retrival 방법 차이에 따른 차이점 1. PAP법 2. ABC법 일차/이차 항체 사용농도조절에 따른 결과 차이 발색제의 종류와 해석상 차이, 장단점 판독시의 문제점

본문내용

7. 방 법
1. 슬라이드를 냉장고로부터 꺼내 실온에 10min 동안 둔다.
2. 아세톤(냉동고 보관)을 round coplin jar에 넣은 슬라이드가 잠기도록 붓고 2 min 동안 둔다.
3. 아세톤을 다시 bottle에 붓고 slides를 꺼내서 실온에 10 min동안 둔다. 건조가 다되면 labelling을 하고 pap pen으로 원을 그린다.
4. 슬라이드를 fourcornered coplin jar에 넣고 1XPBS로 3회 세척한다.
5. H2O2(3%)를 100μl씩 원 안에 침적한다.
6. 1X PBS로 1회 세척한다.
7. 일차 항체를 처리(in humid chamber)한 후 실온에 1hr동안 둔다.
8. 1X PBS로 3회 세척한다.
9. 이차 항체를 처리(in humid chamber)한 후 실온에서 30min동안 둔다.
10. 1X PBS로 3회 세척한다.
11. Streptavidin 처리(in humid chamber)한 후 실온에서 30min동안 둔다.
12. 1X PBS로 3회 세척한다.
13. AEC solution(혹은 DAB)를 80μl씩 침전한 후 실온에서 5min동안 둔다.
14. 흐르는 물로 세척한다.
15. 현미경으로 관찰한 후 hematoxylin sol. 80μl 처리 후 3min동안 둔다.
16. mounting media를 넣고 cover glass로 mounting한다. 이 때, 기포가 생기지 않도록 조심한다.
* 우리 조의 경우 spleen 조직의 CD4를 DAB 발색제를 이용하여 관찰하였다.

참고 자료

없음