5주차_Transformation

목차

I. Purpose

II. Theory
1. Competent cell (DH5α)
2. Plasmid DNA
3. Ampicillin resistance
4. Transformation
5. Transformation efficiency
6. Serial dilution
7. Plating (spreading)
8. SOC

III. Apparatus/reagent

IV. Procedure
1. Transformation
2. Plating

V. Data&Results

VI. Discussion

본문내용

Purpose: E.coli의 transformation을 진행하고, transformation efficiency를 계산한다.

Theory
1. Competent cell (DH5α)
일반적으로, 박테리아가 외부의 DNA를 받아들이는 것은 매우 제한적이기 때문에 형질전환 은 효율적으로 일어나지 않는다. 따라서, 형질전환을 위해서는 외부의 DNA를 보다 효율적으 로 받아들일 수 있도록 변형된 cell이 필요한데, 이를 competent cell이라고 한다. 실험실에서 자주 사용되는 competent cell에는 BL21과, DH5α가 있다. 먼저 BL21은 ompT protease가 mutation되었기 때문에 단백질 분해효소가 기능을 잃는다. 그리고, 이번 실험에서 사용하는 DH5α는 recA1의 160번 자리가 Glycine에서 aspartic acid로 mutation되어 endonuclease가 기 능을 잃고, 재조합효소 활성이 억제된다. 즉, DH5α는 삽입된 plasmid를 분해하지 않는다는 장 점을 갖는다.

2. Plasmid DNA
plasmid는 extrachromosomal DNA 분자로, chromosonal DNA와는 물리적으로 분리되어 독 립적으로 복제될 수 있다. 주로 환형의 이중나선 DNA 분자로 박테리아에서 관찰된다. 염색체 는 주로 일반적인 환경에서 생존할 때 필수적인 중요한 유전정보를 포함한다. 하지만, plasmid 는 작고 부수적인 gene을 포함한다. 이러한 정보는 특별한 환경에서 유용성을 갖기도 한다. 예를 들어 자연에서 plasmid는 유기체의 생존과 항생물질 내성에 관여하며, 하나의 박테리아 에서 다른 박테리아로 conjugation을 통해 전달될 수 있다(horizontal gene transfer). 분자 cloning에서 인공 플라스미드는 vector로 사용된다.

참고 자료

Jeremy M.Berg, Biochemistry, 8th, W. H. Freeman, 2015, pp872-874, p924
B. Alberts, Molecular Biology of the Cell, 6th, Garland Science, 2014, pp267-269, pp278-300