[생명공학실험 예비레포트]Transformation

소개글

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) 형질전환(Transformation)
2) 형질전환 원리
3) 형질전환 사례
4) 형질전환이 발견된 배경
5) 형질전환의 방법
6) Competent Cell
7) Competent Cell의 종류
8) Competent Cell의 제조방법
9) 락 오페론(Lac Operon)
10) 락 오페론 Mechanism

4. 기구 및 시약
1) 기구
2) 시약
3) 사전 준비

5. 실험 방법

6. 참고 사항
1) IPTG
2) 5’ RACE
3) T4 DNA ligase
4) Lac Operon (젖당 오페론) lactose opreron
5) Phosphodiester bond (인산디에스터결합)
6) Ampicillin (암피실린)
7) Single strand (단일 가닥 결합 단백질)
8) X-gal
9) Transfection과 Transformation(형질전환)
10) 뜨겁지 않을 정도로 식으면 ampicillin을 넣는 이유
11) Heat shock을 주는 이유
12) Inverting을 해주는 이유
13) ALB배지에 앰피실린을 넣는 이유
14) 배지를 뒤집는 이유
15) Plate를 37℃ incubator에 overnight 시키는 이유
16) LB 배지

본문내용

3) 실험 목적
- 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환 후, ampicillin과 x-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시킨 후, 색깔로 재조합 DNA를 판별한다.
- 형질전환 기술을 익힌다.
- Lac Operon의 Mechanism을 이해한다.

4) 실험 이론
∎ 형질전환(Transformation)
- 형질전환이란 유전물질인 DNA를 다른 계통의 살아 있는 세포에 주입했을 때, DNA가 그 세포에 들어가 유전형질(遺傳形質)을 변화시키는 현상을 의미한다. 형질전환은 세균에서 쉽게 관찰되며 인공적으로 유전자 조작을 통해 일어날 수 있다. 특정 길이의 DNA를 복제해야 할 필요가 있는 경우 여러 가지 방법으로 이루어지는데, 가장 간단한 방법이 DNA를 분열 속도가 빠른 박테리아에 주입하는 것이다. 주입한 DNA를 받아들인 박테리아가 DNA 복제를 할 때 주입된 DNA도 같이 복제된다. 형질전환은 박테리아가 죽은 박테리아의 DNA 혹은 제한효소 처리를 한 DNA를 세포막을 통하여 세포 내부로 끌어당겨 자연적으로 흡수하는 과정을 거치게 되며, 실험실에서 전기적인 자극을 제공 하여 강제로 세포가 수용하게 만들 수 있다. 유입된 DNA가 재조합되어 새로운 DNA가 되면 박테리아가 다른 종류로 전환하게 되는데 이 때문에 형질전환이라는 용어가 생겨 났다. 이는 DNA가 유전물질이라는 것을 입증하는 증거가 되고, 사람과 같이 복잡한 생물체에서 얻은 DNA를 이용하여 실험실에서 쉽게 연구할 수 있게 되었다.

∎ 형질전환 원리
- E.coli의 세포막의 지질(lipid)은 negative charge이다. 그리고 DNA 역시 negative charge를 띤다. 따라서 이 둘은 서로 반발력이 발생한다.

참고 자료

없음