Plant genomic DNA extraction

소개글

식물에서 DNA를 추출 한 실험

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
이 실험은 식물의 유전체 DNA를 추출해 maker size를 이용해 식물의 유전체 DNA의 크기를 알아보는 실험이다. 이번 실험을 통해 식물조직의 고정여부에 따라 DNA band가 어떻게 나타나는지, RNase 처리를 했을 때와 하지 않았을 때의 band가 어떻게 나타나는지를 비교 관찰 하는데 목적이 있다.
실험은 0.2g 당근 잎을 액체 질소를 넣고 막자사발에서 막자로 간다. RNA를 제거할 필요가 있을 때 RNase 처리를 해준다. 20% SDS 용액1을 넣고 65℃에서 10분간반응 후 5M 칼륨아세트산을 넣고 얼음에 20분 이상 반응시킨다. 튜브를 4℃에서 13000rpm로 20분간 원심분리 후 상층액을 옮기고 그와 동일한 양의 이소프로필 알코올을 넣는다. 그리고 다시 15분간 튜브를 4℃에서 13000rpm로 원심분리 한다. 상층액 제거 후 70%에탄올로 씻은 후 다시 2~3분 원심분리 한다. 상층액을 버리고 튜브를 말린 후 DNA를 증류수에 녹인 뒤 10μl를 취해 아가로오스 전기영동을 하여 추출된 DNA의 양상을 조사한다. 이때 적절한 크기의 size maker를 이용한다.
실험 결과 에탄올 고정시킴의 여부의 차이가 DNA band의 깨끗함과 끌림의 정도가 다르게 나타났다. 그리고 RNase 처리를 하면 DNA밴드만 볼 수 있다.
이 실험으로 식물체의 DNA를 추출 할 수 있고 추출한 DNA의 크기를 maker size를 통해 10kb 보다 많이 클 것이라고 추정할 수 있고 RNase를 이용해 RNA를 제거 하지 않았다면 RNA의 크기 또한 maker size를 통해 0.1Kb~0.2Kb라는 것을 알 수 있다.

2. Introduction
Colning의 단계에서 중요하다고 할 수 있는 부분이 바로 Colning할 DNA를 분리해내는 과정이다. 이렇게 분리한 DNA를 Vector의 DNA와 재조합 시켜줌으로 인해서 Colning Vector를 만들어 주는 것이다. 식물체에서 DNA를 분리하는 과정은 기본적으로 1) 식물체 분쇄, 2) 세포 용해(cell lysis), 3) 용해된 세포에서의 DNA 추출 등의 단계로 이루어진다.

참고 자료

①분자생물학 2판 / 박상대 / 라이프 사이언스 / 84
②http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=TsF1w5862z7qJz1NKkI0u6Fk5DD32FXS&qb=RE5BIOu2hOumrCDsnbTsmqk=&enc=utf8
③http://dasan.sejong.ac.kr/~yjlee/p-agarose%20gel.htm
날 짜
2009.04.03
학 번
200511018
성 명
천주용
담당 교수님
노영미 교수님
④http://users.rcn.c om/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/G/GenomeSizes.html