유전자치료공학 관련 2차 정리본입니다.

소개글

유전자치료 즉, Gene therapy에 이용되는 다양한 vector들의 소개 및 적용 방법을 소개하고 있으며, 어떻게하여 의약품의 생산이 이루어지는지를 다루고 있습니다.

목차

Viral Vector

Non Viral vector

Application to diseases

How to Production
- upstream processing
- downstream processing
- Regulation

본문내용

Virus vector

1. retrovirus vector
기본적으로 Retroviridae family는 DNA provirus일떼, 5’LTR-Gag-Pol-Env-LTR3’으로 구성
- Gag (Virion structural protein, protease) / Pol(Reverse transcriptase, Integrase, Protease) / Env(Envelope glycoprotein)
Genome structure가 overlapping되어 Splicing에 의해 다른 단백질을 생산함
- Lentivirus-derived vectors (Cis active element)
→ Gag와 Pol의 충분한 발현을 위해서는 Post-transcriptional activator인 Rev이 필요
▶ Tet와 Rev는 Regulatory gene, Vif, Vpx, Vpu, Vpr, Nef는 Accessory gene
→ 일반적으로 Retrovirus Vector을 형성할 때, 1) Defective gene transfer vector / 2) synthesis of enzymatic and structural viral protein vector로 나눠서 구축
▶ Viral sequence를 나눔에 따라, risk를 최대한 감소시켜, Safety를 높임
1) Defective gene transfer vector (Lentiviral plasmid)
- Viral protein coding sequence를 제거한 후에, Reporter gene 또는 Therapeutic interest를 삽입, 이때 integration과 발현에 필요한 sequence를 포함시킬 수 있음
→ Plasmid containing gene of interest
2) synthesis of enzymatic and structural viral protein vector (Packaging Plasmid)
- Viral particle을 형성하기 위해, missing viral protein을 Packaging or Transcomplementing cell line을 통해 가져오는 것이 필수적이다. Packaging plasmid는 적절한 Transcription, Packaging, reverse transcription, integration에 필요한 Trans-acting protein을 보유하고 있다. [(Gag, Pol, Env)에 대한 Plasmid]
→ Plasmid containing packaging plasmid (주로, Gag, Pol sequence)
→ Plasmid containing Rev protein
→ Plasmid containing Envelope protein (VSV-G EV → Pseudotype lentivirus 생산)
▶ 주로 Vesicular stomatitis virus(VSV-G)의 EV protein을 사용하여 Cell attachment, membrane fusion을 촉진하도록 함. 이는 Robust stability를 제공하고, infection이 가능한 cell type의 종류를 넓히는데 이용

참고 자료

없음