[공학]Restriction Enzyme Reaction

*선*

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최초 등록일: 2007.05.14
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Restriction Enzyme Reaction 실험 예비레포트입니다.

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【Objectives】
세균 내의 Plasmid를 세포 밖으로 빼내고 restriction enzyme으로 고리를 끊은 뒤, 가령 사람의 인슐린을 만드는 데 관여하는 DNA 조각을 이에 끼워 맞춰 다시 세균의 세포 내로 돌려보내 넣어주면 이종(異種)의 DNA 조각을 가진 재조합 Plasmid는 정상적으로 증식하고 세균이 분열할 때마다 인슐린을 생성하게 된다. 이때 plasmid vector systems의 과정과 원리를 이해하는 것이 본 실험의 목적이다. 또한 restriction enzyme으로 DNA를 절단한 후 DNA fragments의 양의 확인, 분리 등을 위해 electrophoresis을 직접 실험해 본다. Electrophoresis에는 많은 종류가 있으나 본 실험에서는 DNA 전기영동에서 많이 쓰이는 agarose gel electrophoresis을 사용한다.

【Theory】
A. Restriction enzyme : 특정한 염기서열을 인식하여 DNA를 절단하는 특성을 가지고 있는 효소이다. DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 restriction enzyme이며, 그림1에서와 같이 DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다.

참고 자료

1. 두산 세계 대백과 사전
2. Belk & Borden / Biology-Science for Life / Life Science / 137-138, 161-162쪽 / 2005
3. 연세의대 생화학-분자생물학교실 홈페이지 (http://biochemistry.yonsei.ac.kr/)
4. 화공생명기초실험 책자
5. http://www.uni-graz.at/~binder/thesis/node41.html
6. 한국 산업 안전 공단 홈페이지 (http://www.kosha.or.kr/index.jsp)
7. http://en.wikipedia.org/wiki/Main_Page

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