Restriction Digestion, Elution of DNA fragments for Ligation

소개글

유전자 재조합의 첫 번째 과정인 재조합 plasmid를 제작하는 것이 목적이다. plasmid를 제한효소로 잘라낸 뒤, 전기영동을 거쳐 우리가 원하는 부분을 골라 회수하고, 이를 ligation 시킨다.

목차

1. 실험제목
Restriction Digestion, Elution of DNA fragments for Ligation
2. 실험일자
3. 제출지 및 공동 실험자
4. 목적
5. 원리
1) restriction enzyme
2) electrophoresis
3) DNA size marker
4) Agarose gel에서 DNA의 용출
6. 시약 및 기자재
Ⅰ. plasmid digestion and restriction enzyme
Ⅱ. Method for the Isolation of DNA Frgments from agarose gel with Elution columns.
Ⅲ. Ligation
7. 방법
Ⅰ. plasmid digestion and restriction enzyme
Ⅱ. Method for the Isolation of DNA Frgments from agarose gel with Elution columns.
1. 1.0% Agarose gel elctrophoresis
2. Isolation of DNA fragment by QIAquick Gel Extraction Kit Protocol
Ⅲ. Ligation
8. 결과
9. 고찰
10. 참고문헌
11. 숙제
1) sticky end를 blunt end로 바꾸어 주는 restriction enzyme
(1) sticky end를 cutting 해서 blunt end로 만드는 법
(2) sticky end를 fill-in 해서 blunt end로 만드는 법

본문내용

1. 실험제목

Restriction Digestion, Elution of DNA fragments for Ligation

2. 실험일자

3. 제출지 및 공동 실험자

4. 목적

유전자 재조합의 첫 번째 과정인 재조합 plasmid를 제작하는 것이 목적이다. plasmid를 제한효소로 잘라낸 뒤, 전기영동을 거쳐 우리가 원하는 부분을 골라 회수하고, 이를 ligation 시킨다.

5. 원리

1) restriction enzyme

세균은 외부에서 들어오는 DNA를 절단하여 자신을 보호하는 기능이 있다. 이와 같이 DNA를 절단하는 효소를 제한효소(resriction enzyme)라 한다. 제한 효소는 1970년 네이선스와 스미스가 미생물로부터 발견하였으며, 대장균에는 람다 파지( phage)의 DNA가 들어오면 그것을 절단하는 제한효소가 있는데, 이 효소는 외래 DNA의 특정한 염기서열을 인식하여 절단하여 자신을 보호한다. 제한효소의 명명은 그것을 생산하는 균주의 속명의 첫 글자를 이탤릭체 대문자로, 종속명의 두 글자를 이탤릭체 소문자로 나타낸다. 예를 들면, HindⅢ의 경우, Haemophilus influenzae Rd로부터, KpnⅠ은 Klebsiella pneumoniae OK8로부터, SmaⅠ은 Serratia marcescens로부터 각각 분리한 것이다.

참고 자료

* Lehninger principle of biochemistry 4th edition, David L. Nelson, Michael M. Cox, freeman
* http://k.daum.net/qna/kin
* http://search.empas.com/search/ok_pvw.html?* http://kin.naver.com/db/detail.php?* http://blog.naver.com