[생물공학]SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate PolyAcrylamide Gel Eletrophoresis)

소개글

SDS-PAGE 에 관련된 이론 및 세부 protocol에 관한 저의 자료 입니다.
현재 제가 쓰고 있는 실험 방법이기도 하구요...
학생들(학부생 및 대학원생)에게 가르쳐 주기 위해 만들었던 파일입니다.
자세하고 명료함은 보장 합니다~!!! ^^

목차

▲ 전기영동의 원리
▲ 실험 방법
▲ 실험 도구 및 재료
- 각각의 solution 구성

본문내용

▲ 전기영동의 원리
- Acrylamide를 가교제(cross-linker)로 중합한 polyacrylamide gel 이용
→ acrylamide와 가교제의 농도및 비율에 의해 gel내 미세통로의 크기를 조절
: 다양한 크기의 생체 분자들을 분리
높은 정밀도와 고분해능으로 인해 오래 전부터 단백질, 핵산 등의 분리에 널리 사용

- 가교제에 의해 중합되어 생긴 gel은 적절한 강도와 탄성을 유지, polypeptide가 통과할 작은 구멍을 형성
- Acrylamide의 중합은 ammonium persulfate (APS)의 첨가에 의해 개시
- 촉매제로N,N,N`,N`-tetramethylethylenediamine (TEMED)사용
→ persulfate로부터 자유라디칼의 생성을 촉매 함으로써 중합을 개시
- 완충용액(running buffer)에 포함된 glycine에 의해 음전하와 양전하를 동시에 띔
→ 이온의 성질을 이용 gel내의 pH조건에 따라 glycine의 charge와 전기영동속도를 조절
→ 전류를 흘려주면 leading 이온인 Cl-이온과 단백질, glycine이온이 모두 양극을 향해 출발
- 낮은 pH 조건에서도 이동도가 빠른 Cl-이온과 이동도가 느린 glycine 이온 사이에 매우 높은 전위차가 형성, 이러한 전위차에 의해 glycine이온이 Cl-이온을 빠르게 뒤따르게 된다.
상대적 이동속도 : glycine < 단백질 < Cl-
- 단백질은 Cl-와 glycine 이온사이에 축적되어 이동
※ Cl-와 glycine 이온의 간격은 수㎛로서 많은 용적의 시료에 있던 단백질도 running gel에 들어가기 전에 이 사이에 축적되어 해상도를 높이는 효과를 나타내게 됨 → 줄서기 현상
- Running gel에 이르게 되면 높은 pH는 glycine이온을 음전하로 강하게 대전시켜 glycine의 이동속도가 단백질보다 빠르게 되며 단백질은 gel내에서 molecular sieving현상에 의해 분리

참고 자료

없음