면역학 MTT ASSAY 실험 레포트

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목차

1.실험제목(title)
2.실험날짜(date):
3.실험목적(purpose):
4.실험 준비물(material-reagent, instrument)
5.실험 방법(method)
6.실험 결과(result)
7.실험 고찰(discussion)
8.참고문헌(reference)

본문내용

실험제목(title): Splenocyte isolation and MTT assay

· 실험날짜(date):

· 실험목적(purpose): aseptic technique과 비장세포 분리방법을 습득하고 mitogen의 농도에 따른 림프구의 증식을 확인하고자 한다.

· 실험 준비물(material-reagent, instrument)
비장, pipet, tube, syringe, serum free media, complete media, strainer, centrifuge, cell lysis buffer, PBS, trypan blue, hematocytometer, 70% ethanol, 가위, 집게, conA, r96 well, 현미경, DMSO, multi pipet

· 실험 방법(method)
① 비장을 잘라서 5ml serum free media가 담긴 dish에 담근 후 잘게 자른다.
② syringe의 뒤쪽으로 비장조직을 짓눌러 갈아낸다.
③ 50ml 튜브에 40um strainer을 연결한 후, pipet을 이용하여 strainer에 거른다.
④ serum free media 10ml로 dish에 남아 있는 cell을 씻어준다.
⑤ 1500rpm, 5분 centrifuge 한 후, 상층액을 suction한다.
⑥ red blood cell lysis buffer 1ml로 세포를 풀어준 후, 실온에서 10분간 기다린다.
⑦ complete medai를 10ml 넣어주어 lysis buffer의 반응을 중단시킨 후, strainer에 거른다.

참고 자료

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https://www.stemcell.com/performing-total-nucleated-cell-counts-with-a-hemocytometer.html