PCR 기법을 이용한 DNA 복제와 DNA 전기영동 실험 보고서

소개글

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목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험원리
4. 실험 재료 및 방법
5. 실험 결과
6. 실험에 대한 고찰
7. 추가 자료 조사
8. 참고문헌

본문내용

실험목적
DNA 복제를 통해 양을 늘리는 PCR 과정을 수행한 후 전기영동을 통해 증폭된 DNA의 크기를 관찰한다.

실험원리
중합효소 연쇄반응(Polymerase chain reaction)이다. 1983년 K.B.Mullis에 의해 고안되었고 검출을 원하는 특정 표적 유전자를 증폭하는 방법이다. PCR에 의해 미량인 DNA 시료에서 목적인 특정 영역인 DNA를 수시간에 20만~50만배로 증폭시킬 수 있다. 이는 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에서 사용되고 있다. 중합효소 연쇄 반응에 의해 소량의 유전물질로부터 염기 순서가 동일한 유전물질을 많은 양으로 증폭할 수 있으므로, 인간의 DNA를 증폭하여 여러 종류의 유전질환을 진단하는 데 사용된다. 또한 세균이나 바이러스의 DNA에 적용하여 감염성 질환의 진단 등에 사용할 수 있다.
증폭된 DNA를 관찰하기 위해서 주로 Agarose gel을 이용한 DNA 전기영동이 사용된다. 이번 실험에서도 이를 통해 증폭된 DNA의 크기를 관찰할 것이다.

실험 재료 및 방법
<실험 재료>
PCR premix(Taq polymerase, dNTPs, buffer, MgCl2), DNA template, Primers, 증류수(DW), 1X TAE buffer, Agarose, 6X DNA loading buffer, DNA gel staining dye, 마이크로 피펫(20P), 피펫 팁(yellow, 2~200μL), 소형 원심분리기, PCR thermal cycler, LED transluminator, 메스실린더, 저울, 전자레인지, DNA electrophoresis 장비 set

<실험 방법>
1. PCR premix tube에 주형 DNA(2μL), primer(2μL)와 증류수(16μL)를 피펫을 이용하여 넣어준다
2. PCR cycler에 Rxn mixture를 넣고, 아래의 설정으로 반응을 진행한다.
3. PCR 반응이 진행되는 동안 1% agarose gel을 만든다.

참고 자료

캠벨 생명과학
PCR (naver.com)
중합효소 연쇄 반응 (naver.com)
http://local.koreasci.com/download/manual/Edvotek/EDS48.pdf
http://compbio.korea.ac.kr/wiki/images/8/82/TakarPCRprotocol.pdf