[화학생물학실험 예비레포트 및 결과레포트] Genomic DNA isolation from mouse tail (Tail Lysis)

목차

1. 실험제목

2. 실험 목적

3. 시약 및 기구

4. 실험 이론
1) Lysis buffer (용해 완충액)
2) Ethanol Precipitation (에탄올 침전법)

5. 주의사항

6. 실험방법

7. 실험결과

8. 고찰

9. 참고문헌

본문내용

1. Lysis buffer (용해 완충액)
1) 역할: 세포막과 핵막을 용해시키고 DNA 추출 과정에서 pH를 유지한다. 또한 용해 과정에서 DNA를 보호하고 다른 세포 찌꺼기로부터 분리해준다.
2) 구성
① Tris-HCl: 오랫동안 보관해도 안정하고 순도가 높아 실험에 자주 쓰이는 완충 용액의 요소이다. 용해물의 pH를 완충하기 위해 사용된다.
② NaCl: DNA와 단백질의 분리와 단백질들이 DNA와 함께 알코올에 침전되지 않도록 돕는다.
③ EDTA: 킬레이트 화합물을 형성하는 금속 이온과의 강한 친화력으로 효소가 필요로 하는 금속 이온을 제거하여 효소의 생성을 억제함으로써 시료의 손상을 방지한다.
④ SDS: 단백질의 완전한 용해를 돕는 물질로 단백질을 선형화하여 음전하를 전달, 단백질을 변성시킨다.

2. Ethanol Precipitation (에탄올 침전법)
: DNA가 침전되기 위해서는 용액에서의 DNA 용해도를 낮춰야한다. 에탄올은 -OH기의 극성이 DNA 염기 사이에 존재하는 수소 결합을 방해하고, 물과 DNA의 상호작용에서 물이 DNA 대신 친화도가 더 높은 에탄올과 결합함으로써 DNA를 침전시킨다. 사용한 buffer에 존재하는 salt는 DNA의 Phosphate기를 봉쇄, DNA를 중화시켜 친수성을 떨어뜨린다.

참고 자료

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Gomori, G., Preparation of Buffers for Use in Enzyme Studies. Methods Enzymology., 1, 138-146 (1955)
Donald Voet, Voet 생화학의 기초, 자유아카데미, 2017
김준, 생화학 분자생물학 실험서, 범문에듀케이션, 2019