PCR, 전기영동과 미생물 동정

소개글

Bacillus와 E.coli 두 균주를 사용한 PCR(중합효소연쇄반응) 실험 과정과 전기영동 과정을 기술한 리포트 입니다. 또 임의로 제공된 미생물 염기 서열을 이용하여 해당 종을 분석하는 과정을 포함하고 있습니다. 이외에 미생물 동정 방법과 PCR 종류, PCR에 사용되는 polymerase 등에 대해서도 정리하고 있는 리포트입니다.

목차

Ⅰ. Date

Ⅱ. Group

Ⅲ. Title

Ⅳ. Introduction
1. 미생물 동정
2. Phylogeny와 Phylogenetic tree란?
3. PCR이란?

Ⅴ. Materials : 실험 준비물
1. PCR 준비물
2. 전기영동 준비물

Ⅵ. Methods : 실험 과정
1. PCR 실험 과정
2. 전기영동 실험 과정

Ⅶ. Result : 실험 결과(별도로 제공된 염기 서열 분석 포함)

Ⅷ. Discussion : 실험 후 고찰
1. PCR 종류 조사
2. PCR에 사용되는 DNA polymerase 종류 조사
3. 코로나바이러스 감염증-19 진단과 PCR

Ⅸ. Reference : 참고 문헌

본문내용

◆ Date : 2021 / 05 / 18

◆ Group : 연구조

◆ Title : 미생물 동정

◆ Introduction : 미생물 동정과 Phylogeny, PCR

① 미생물 동정

- 미지의 미생물이 분류체계에서 어디에 위치하는지 규명하는 것이 동정의 핵심이다. 보통 고전적 방법으로 형태적, 배양적 특성을 가지고 동정할 수 있고, 최종적으로 종(species)을 규명하기 위해서는 생리 생화학적 및 유전적 분석이 필요하다.

ⓐ 미생물 동정 방법 – 형태학적 방법
- colony 형태, 운동성, 편모 여부, 세포 형태 등 고전적 관찰 방법이다.
- 그람 염색도 이 방법에 포함된다.

<중 략>

◆ Methods : 실험 과정

- PCR 실험 과정

① 준비된 두 PCR 큐브(큐브 A, 큐브 B)에 네임펜을 이용해서 각각 Bacillus와 E.coli의 라벨링을 했다.

② 두 PCR 큐브와는 다른 PCR 큐브(큐브 C)에 투입될 물질에 대한 완충작용을 위한 10 x buffer 6μl를 투입했다.

③ 큐브 C에 신장을 위한 dNTP 6μl, 적절 범위의 증폭을 위한 Primer F와 Primer R 각각 3μl를 투입했다.

④ 큐브 C에 중합 과정을 위한 Taq polymerase 0.6μl를 투입했다.

⑤ 큐브 C에 200μl 피펫으로 41.4μl의 물(증류수)을 투입했다.

⑥ 큐브 C의 혼합물을 큐브 A와 큐브 B에 20μl씩 분배했다.

⑦ 큐브 A와 큐브 B에 Bacillus와 E.coli를 각각 1 colony씩 피펫으로 투입했다.

⑧ 유전자 증폭기에 큐브 A와 큐브 B를 넣었다.

⑨ 초기 변성 시간은 확실한 변성을 위해 섭씨 95도에서 5분으로 설정한 뒤 이후 30초로 설정했다. 다음으로 섭씨 55도에서 30초, 섭씨 72도에서 2분으로 설정한 뒤, 이 과정을 30번 반복하도록 설정했다.

참고 자료

한국식품과학회, 한국식품과학회지 48(5), 김진희 외 5인, 2016.10, 454p
대한바이러스학회, JOURNAL OF BACTERIOLOGY AND VIROLOGY 23(1), 김경희, 1993.06, 40~42p
한국콘텐츠학회, 한국콘텐츠학회논문지 21(1), 김진희, 2021.01, 465~468p